四磨湯對(duì)正常及糖尿病大鼠胃動(dòng)力的影響.pdf

1、第一部分四磨湯對(duì)正常大鼠胃竇平滑肌舒縮活性的影響及機(jī)制研究
　　目的：①探討四磨湯對(duì)于SD大鼠胃竇縱、環(huán)行平滑肌條舒縮活性的影響;②研究SMD作用于胃竇縱、環(huán)行平滑肌可能的機(jī)制。方法：①離體胃竇縱、環(huán)行平滑肌條置于盛有Krebs液的組織浴槽中,記錄其等長(zhǎng)收縮活動(dòng),觀(guān)察累積量SMD(1μL、5μL、25μL、50μL、100μL、150μL、200μL)及等體積Krebs液(對(duì)照)對(duì)大鼠胃竇縱、環(huán)行肌(均n=8)收縮活動(dòng)的影響;②觀(guān)

2、察累積量乙酰膽堿對(duì)胃竇縱、環(huán)行肌(均n=8)收縮活動(dòng)的影響及其最大效應(yīng)與四磨湯的比較;③觀(guān)察非選擇性毒蕈堿(M)受體阻斷劑阿托品、選擇性M3受體阻斷劑4-DAMP或M2受體阻斷劑Gallamine(10-6mol/L)對(duì)SMD誘發(fā)的胃竇縱、環(huán)行肌(均n=8)收縮活動(dòng)的影響;④觀(guān)察腎上腺素受體興奮劑腎上腺素(Adrenaline,10-7mol/L)、外源性一氧化氮供體左旋精氨酸、煙堿(N)受體阻斷劑六烴季胺及鈣通道阻斷劑硝苯地平對(duì)SMD

3、誘發(fā)的胃竇縱、環(huán)行肌收縮活動(dòng)的影響。結(jié)果：①SMD劑量依賴(lài)性引起胃竇縱、環(huán)行平滑肌收縮,與對(duì)照相比其收縮活動(dòng)顯著增加(均P<0.05),但SMD誘發(fā)的縱、環(huán)行肌收縮無(wú)顯著差異;②乙酰膽堿累積量加入可劑量依賴(lài)性引起胃竇縱、環(huán)行平滑肌收縮,其最大效應(yīng)(10-3mol/L)明顯低于SMD最大效應(yīng)(均P<0.05);③Atropine+SMD、4-DAMP+SMD及4-DAMP+Gallamine+SMD誘發(fā)的胃竇縱、環(huán)行肌條收縮活動(dòng)顯著低于單

4、純SMD誘發(fā)的肌條收縮活動(dòng)(均P<0.05),但Gallamine僅部分抑制SMD誘發(fā)的縱、環(huán)行肌收縮活動(dòng)(均P<0.05),Atropine及Gallamine對(duì)SMD誘發(fā)縱行肌收縮活動(dòng)的抑制弱于其對(duì)環(huán)行肌的作用,而4-DAMP及4-DAMP+Gallamine對(duì)SMD誘發(fā)縱行肌收縮活動(dòng)的抑制強(qiáng)于其對(duì)環(huán)行肌的作用;④Adrenaline+SMD、L-arginine+SMD、Nifedipine+SMD及Hexamethonium+S

5、MD誘發(fā)的胃竇縱、環(huán)行肌條收縮活動(dòng)顯著低于單純SMD誘發(fā)的肌條收縮活動(dòng)(均P<0.05),除Nifedipine對(duì)SMD誘發(fā)縱行肌收縮活動(dòng)的抑制強(qiáng)于其對(duì)環(huán)行肌的作用外,Adrenaline、L-arginine及Hexamethonium對(duì)SMD誘發(fā)縱行肌收縮活動(dòng)的抑制均弱于其對(duì)環(huán)行肌的作用。結(jié)論：①SMD可促進(jìn)胃竇縱、環(huán)行肌收縮,并具有劑量依賴(lài)性;②SMD主要通過(guò)激活M3受體,部分通過(guò)激活M2受體、N受體及鈣通道、抑制NO的釋放及阻斷

6、腎上腺素能受體引起胃竇平滑肌收縮;③SMD誘發(fā)縱行肌收縮較環(huán)行肌更多的依賴(lài)于M3受體及鈣通道的興奮,而環(huán)行肌對(duì)SMD的反應(yīng)更多的依賴(lài)于M2及N受體的興奮、腎上腺素受體的阻斷及對(duì)NO釋放的抑制,除此之外尚可能有其他M受體也參與了SMD對(duì)胃竇縱、環(huán)行肌收縮活動(dòng)的調(diào)節(jié)。
　　第二部分四磨湯對(duì)糖尿病大鼠胃動(dòng)力的影響
　　目的：研究四磨湯對(duì)糖尿病鼠血糖、體重、胃排空及胃竇平滑肌收縮活性的影響。方法雄性SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組、糖尿病模

7、型組(DM)、糖尿病 SMD低劑量治療組(TLS,0.15ml/kg)、中劑量治療組(TMS,1.5ml/kg)、高劑量治療組(THS,3.0ml/kg)及中劑量預(yù)防組(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治療組在造模成功后8w開(kāi)始SMD灌胃干預(yù),對(duì)照組及模型組采用生理鹽水灌胃,為期2w,預(yù)防組從造模成功后即開(kāi)始干預(yù),為期10w。分別于造模前、造模后72h(0w)、造模后8w(8w)及10w(10w)監(jiān)測(cè)血糖及體重,10w時(shí)酚紅餐法

8、檢測(cè)胃排空。分離胃竇,制備縱、環(huán)行平滑肌條,觀(guān)察累積量乙酰膽堿(Acetylcholine,10-7-10-3mol/L)對(duì)各組大鼠胃竇縱、環(huán)行肌條自發(fā)性收縮活動(dòng)的影響。結(jié)果：①SMD對(duì)糖尿病鼠血糖及體重?zé)o明顯影響;②糖尿病模型組大鼠胃排空顯著低于對(duì)照組(46.35％±8.74％vs60.44％±8.44％,P=0.005);但隨著SMD干預(yù)劑量的增加,糖尿病大鼠胃排空也逐漸增加:TLS55.21％±9.91％(P=0.061vsDM)

9、;TMS79.19％±9.94％(P=0.000vsDM,P=0.000vsTLS),THS85.00％±7.49％(P=0.000vsDM,P=0.000vsTLS,P=0.211vsTMS),中劑量預(yù)防組大鼠胃排空與中劑量治療組相比無(wú)顯著性差異(85.15％±6.53％vs79.19％±9.94％,P=0.179);③糖尿病模型組大鼠胃竇縱、環(huán)行肌條對(duì)累積量乙酰膽堿的收縮反應(yīng)顯著低于對(duì)照組大鼠(均P<0.01),SMD治療干預(yù)后糖尿

10、病大鼠胃竇縱、環(huán)行肌條對(duì)于累積量乙酰膽堿的收縮反應(yīng)顯著增加(均P<0.01),中劑量預(yù)防組胃竇縱、環(huán)行肌條對(duì)于累積量乙酰膽堿的收縮反應(yīng)低于中劑量治療組(均P<0.01)。結(jié)論：①糖尿病鼠胃排空明顯延緩,胃竇平滑肌收縮活性明顯下降;②SMD可顯著改善糖尿病大鼠胃排空及胃竇平滑肌條的收縮活性;③四磨湯長(zhǎng)期預(yù)防對(duì)于糖尿病大鼠胃排空的改善效應(yīng)并不優(yōu)于短期治療,而短期治療對(duì)胃竇平滑肌收縮活性的改善優(yōu)于長(zhǎng)期預(yù)防。
　　第三部分四磨湯對(duì)糖尿病大

11、鼠胃腸激素的影響
　　目的：探討四磨湯(Simo Decoction,SMD)對(duì)糖尿病大鼠胃竇胃腸激素基因及蛋白表達(dá)的影響。方法：雄性SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(Control)、糖尿病模型組(DM)、糖尿病SMD低劑量治療組(TLS,0.15ml/kg)、中劑量治療組(TMS,1.5ml/kg)、高劑量治療組(THS,3.0ml/kg)及中劑量預(yù)防組(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治療組在造模成功后8w開(kāi)始SMD灌胃干預(yù)

12、,對(duì)照組及模型組采用生理鹽水灌胃,為期2w,預(yù)防組從造模成功后即開(kāi)始干預(yù),為期10w。干預(yù)完畢后處死大鼠,采用Real-time PCR檢測(cè)各組大鼠胃竇血管活性腸肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)、神經(jīng)源性一氧化氮合成酶(Neurogenic nitric oxide synthase,nNOS)、P物質(zhì)(Substance P,SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-relate

13、d peptide,CGRP)及饑餓素(Ghrelin)的mRNA表達(dá),采用western-blot檢測(cè)SP、VIP及nNOS的蛋白表達(dá)。結(jié)果：①糖尿病模型組大鼠胃竇SP、VIP及nNOS的mRNA表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組大鼠(均P<0.01),各劑量SMD治療干預(yù)對(duì)其表達(dá)水平無(wú)影響(均P>0.05);②糖尿病模型組大鼠CGRP的mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組大鼠(P<0.01),中、高劑量SMD治療干預(yù)可顯著下調(diào)其表達(dá)水平(均P<0.

14、01vsDM);③糖尿病模型組大鼠Ghrelin的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組大鼠比較無(wú)差異(P>0.05),但低、中劑量SMD治療干預(yù)后可顯著上調(diào)其表達(dá)水平(均P<0.05vsDM);④中等劑量SMD預(yù)防干預(yù)后糖尿病大鼠胃竇各基因的表達(dá)水平與中劑量SMD治療組比較均無(wú)顯著性差異(均 P>0.05);⑤糖尿病模型組大鼠胃竇SP蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組大鼠(P<0.01),中、高劑量SMD治療干預(yù)可顯著上調(diào)糖尿病大鼠胃竇 SP蛋白表達(dá)水平(

15、均P<0.01vsDM),SMD中劑量預(yù)防干預(yù)后糖尿病鼠胃竇SP蛋白表達(dá)水平顯著高于中劑量治療組(P<0.01);⑥糖尿病模型組大鼠胃竇VIP蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組大鼠(P<0.01),低、中及高劑量SMD治療干預(yù)可顯著下調(diào)糖尿病大鼠胃竇VIP蛋白表達(dá)水平(均P<0.01vsDM),高劑量SMD治療干預(yù)后糖尿病大鼠胃竇VIP蛋白表達(dá)水平顯著低于低及中劑量SMD治療組水平(均P<0.01),SMD中劑量預(yù)防干預(yù)后糖尿病鼠胃竇VIP蛋白

16、表達(dá)水平顯著低于中劑量治療組(P<0.01);⑦糖尿病模型組大鼠胃竇nNOS蛋白表達(dá)水平與正常組大鼠比較無(wú)明顯變化(P>0.05),高劑量SMD干預(yù)可顯著下調(diào)糖尿病大鼠胃竇nNOS蛋白表達(dá)水平(P<0.01vsDM),SMD中劑量預(yù)防干預(yù)后糖尿病鼠nNOS蛋白表達(dá)水平顯著低于中劑量治療組(P<0.01)。結(jié)論：①糖尿病大鼠胃竇VIP、nNOS及SP基因表達(dá)水平下降,CGRP基因表達(dá)水平增加,Ghrelin基因表達(dá)水平與正常鼠相比無(wú)明顯變