不同溫度下福氏志賀菌磷酸化蛋白質(zhì)組的比較差異研究.pdf

1、志賀菌是細(xì)菌性痢疾的主要病原菌之一，其侵襲力受外界環(huán)境影響很大，如30℃時無侵襲力。目前將磷酸化修飾變化-蛋白表達量變化-溫度改變?nèi)呔C合研究的報道較少。本論文運用多維蛋白質(zhì)染色的方法針對30℃、37℃下培養(yǎng)的福氏志賀菌同時展開全蛋白質(zhì)組和磷酸化蛋白質(zhì)組的差異研究。
　　本實驗在平行制備全蛋白樣品后，以二維凝膠電泳進行分離。接著運用蛋白質(zhì)多維染色方法展示其差異，結(jié)合高精度質(zhì)譜鑒定，初步探討福氏志賀菌在不同溫度下磷酸化蛋白質(zhì)組及全蛋

2、白質(zhì)組的修飾及表達變化。
　　本實驗鑒定了55種有磷酸化修飾變化或表達改變的磷酸化蛋白，它們的功能主要集中于翻譯系統(tǒng)(24.6％)、碳源運輸和代謝(21.1％)以及翻譯后修飾(10.5％)。按照磷酸化修飾隨溫度變化分類，有18種蛋白在30℃時磷酸化程度強于37℃，6種蛋白只在30℃有磷酸化修飾，21種蛋白只在37℃有磷酸化修飾，10種蛋白在37℃時磷酸化程度強于30℃。
　　其中，翻譯延伸因子EF-Tu在30℃時磷酸化修飾顯

3、著強于37℃，有研究證明EF-Tu的磷酸化修飾可抑制其功能。核苷二磷酸激酶NDPK在30℃時磷酸化修飾強于37℃，減慢了嘌呤嘧啶合成，從而減緩細(xì)菌30℃時的生長速度。谷氨酸脫羧酶GAD只在30℃有磷酸化修飾，同時30℃時蛋白表達明顯下調(diào)，兩者的共同調(diào)控減弱了它的功能。6-磷酸果糖激酶PfkB只在37℃有磷酸化，它是糖酵解途徑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)中心，其磷酸化修飾有激活糖酵解途徑的功能。37℃時雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中膜孔蛋白OmpC表達量高于30℃，

4、同時37℃時磷酸化修飾也強于30℃，暗示它在37℃時受到表達量與磷酸化修飾的協(xié)同作用而增強。PTS系統(tǒng)中Crr在37℃時磷酸化程度強于30℃，在37℃時表達量也上升，它們的協(xié)同作用可能增強了Crr的功能。
　　志賀菌的毒力主要是通過Ⅲ型分泌系統(tǒng)以及毒力島表現(xiàn)的，在入侵宿主之后需要對機體環(huán)境做出一系列適應(yīng)性改變才能高效發(fā)揮其毒力作用。例如，上文中提到的GAD和OmpC在37℃時在表達水平和磷酸化修飾水平受到同向調(diào)控功能得到增強，以適