注射用銀杏葉提取物凍干粉針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的：研究注射用銀杏葉提取物凍干粉針的性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等方法，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.性狀：根據(jù)三批樣品的實(shí)際性狀描述。 2.鑒別：采用薄層色譜法分別鑒別銀杏葉中的化學(xué)成分。 3.檢查：分別檢查pH值、黃酮苷元峰面積比、水分、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱原、熾灼殘?jiān)?、重金屬、砷鹽、裝量差異以及無(wú)菌檢查。 4.含量測(cè)定：用高效液相色譜法分別測(cè)定銀杏葉中總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯的含量。

2、 (一）總黃酮醇苷的含量測(cè)定 (1)色譜條件的確定：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的配比，使各待測(cè)成分色譜峰的分離度均符合測(cè)定的要求。 (2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察色譜圖中各待測(cè)物峰的分離度，按槲皮素峰計(jì)算理論板數(shù)。 (3)方法學(xué)考察：①專屬性試驗(yàn)：精密吸取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液及對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)，

3、以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。③檢測(cè)限：將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋，當(dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。④重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。⑤精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液分別于0、2、4、6、8、24h進(jìn)樣測(cè)定。⑦回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入一定量的對(duì)照品，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。 (4)樣品測(cè)定：取樣品

4、10批分別制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。 (5)含量限度的確定：根據(jù)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果，初步制定本品每支樣品中總黃酮醇苷的最低含量限度。 (二)萜類內(nèi)酯的含量測(cè)定 (1)色譜條件的確定：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，使各待測(cè)成分色譜峰的分離度均符合測(cè)定的要求。 (2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察色譜圖中各待測(cè)物峰的分離度，按白果內(nèi)酯峰計(jì)算理論板數(shù)。 (3

5、)方法學(xué)考察：①專屬性試驗(yàn)：精密吸取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液及對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，以濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。③檢測(cè)限：將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋，當(dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。④重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。⑤精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣

6、品溶液分別于0、2、4、6、8、24h進(jìn)樣測(cè)定。⑦回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入一定量的對(duì)照品，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。 (4)樣品測(cè)定：取樣品10批分別制各供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。 (5)確定含量限度：根據(jù)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果，初步制定本品每支樣品中萜類內(nèi)酯的最低含量限度。 結(jié)果： 1.性狀：本品為淺黃色至棕褐色無(wú)定形粉末或疏松固體狀物；味微苦；有引濕性。

7、 2.鑒別：成功地對(duì)銀杏葉、萜類內(nèi)酯進(jìn)行了薄層鑒別。 3.檢查：三批樣品的pH值為4.92、4.97、4.99；黃酮苷元峰面積比為：1.08、1.10、1.10；水分測(cè)定結(jié)果為：3.2、3.7、3.9；蛋白質(zhì)檢查未出現(xiàn)混濁；鞣質(zhì)檢查未出現(xiàn)混濁；熱原檢查符合規(guī)定；熾灼殘?jiān)?ml小于0.5mg；重金屬檢查結(jié)果小于百萬(wàn)分之十；砷鹽檢查結(jié)果小于百萬(wàn)分之二；裝量差異在-2.94％～+1.89％；無(wú)菌檢查符合規(guī)定。 4.含量測(cè)定：

8、 （一）總黃酮醇苷的含量測(cè)定：(1)色譜條件：采用C18色譜柱，以甲醇-0.4％磷酸溶液(50:50)為流動(dòng)相，于360nm處檢測(cè)。(2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在此色譜條件下，各待測(cè)組分與其相鄰色譜峰的分離度均在2.0以上，以槲皮素峰計(jì)算理論板數(shù)大于6500。(3)方法學(xué)考察：①專屬性試驗(yàn)：空白輔料的色譜峰對(duì)供試品溶液中各色譜峰無(wú)干擾。②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：槲皮素、山柰素和異鼠李素的回歸方程分別為Y=92806X-37700，r=0.99

9、99，(n=5)；Y=83241X+6600，r=0.9998，(n=5)；Y=101113X-1800，r=0.9998，(n=5)。線性范圍分別為19.32μg/ml～45.08μg/ml；19.26μg/ml～44.94μg/ml；4.44μg/ml～10.36μg/ml。③檢測(cè)限：槲皮素為5.41ng、山柰素為8.62ng、異鼠李素為12.32ng。④重復(fù)性試驗(yàn)：方法的重復(fù)性良好，平均含量4.91mg/支，重復(fù)性的RSD為0.2

10、6％。⑤精密度試驗(yàn)：方法的精密度良好，精密度的RSD均小于1％。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD均小于1％。⑦回收率試驗(yàn)：平均回收率均在99.00％～100.00％，RSD均小于1％。(4)樣品測(cè)定：依據(jù)上述色譜條件進(jìn)行分析，由外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算得到各個(gè)樣品中各待測(cè)組分的含量。(5)含量限度：根據(jù)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果，暫定本品每支樣品中總黃酮醇苷不得少于4.2mg。 (二)萜類內(nèi)酯的含量測(cè)定：(1)色譜條件：采

11、用C18色譜柱，以甲醇-水為流動(dòng)相梯度洗脫，蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)。(2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在此色譜條件下，各待測(cè)組分與其相鄰色譜峰的分離度均大于2.0，以白果內(nèi)酯峰計(jì)算理論板數(shù)大于5000。(3)方法學(xué)考察：①專屬性試驗(yàn)：空白輔料的色譜峰對(duì)供試品溶液中各色譜峰無(wú)干擾。②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯A、B、C回歸方程分別為Y=1.4625X+5.3955，r=0.9995，(n=5)：Y=1.5352X+5.1375，r=0.9998，(

12、n=5)；Y=1.509X+4.8123，r=0.9999，(n=5)；Y=1.2607X+5.1248，r=0.9997，(n=5)；線性范圍分別為9.49μg/ml～22.15μg/ml、0.669μg/ml～3.345μg/ml、0.67lμg/ml～3.355μg/ml和0.387μg/ml～1.935μtg/ml。③檢測(cè)限：白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、B、C的檢測(cè)限分別2.52ng、5.12ng、3.57ng、4.25ng。④重復(fù)性

13、試驗(yàn)：方法的重復(fù)性良好，平均含量為1.929mg/支，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.70％。⑤精密度試驗(yàn)：方法的精密度良好，精密度的RSD均小于1％。⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)：供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，其RSD均小于1％。⑦回收率試驗(yàn)：平均回收率均在98.00％～100.00％，RSD均小于1％。(4)樣品測(cè)定：依據(jù)上述色譜條件進(jìn)行分析，由外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)法計(jì)算得到各個(gè)樣品中各待測(cè)組分的含量。(5)含量限度：根據(jù)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果，暫定本品每支樣品中萜類