半枝蓮藥材和注射用銀杏葉提取物質(zhì)量研究.pdf

1、一、半枝蓮藥材指紋圖譜研究 目的：建立中藥材半枝蓮的HPLC指紋圖譜，獲得對(duì)照?qǐng)D譜，并與不同產(chǎn)地半枝蓮藥材指紋特征相比較，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制半枝蓮藥材質(zhì)量提供新方法。 方法：(1)提?。罕容^了不同提取方法、提取溶劑及提取時(shí)間的提取效果，選擇提取成分較多，提取率較高的提取條件。(2)色譜條件：選用合適的色譜柱及檢測(cè)器，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，調(diào)節(jié)柱溫，選擇最佳的色譜條件，使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。(3)系統(tǒng)適

2、用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中參照物野黃芩苷峰的分離度和理論板數(shù)。(4)精密度試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的相似度。(5)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批半枝蓮藥材6份，平行制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的相似度。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液分別于0、2、4、6、8、24、36、48h進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的

3、相似度。(7)指紋圖譜的建立：分別取不同產(chǎn)地的半枝蓮藥材23批、對(duì)照藥材1批和混淆品6批樣品制備供試品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析。 結(jié)論：本文建立了中藥材半枝蓮的HPLC-UV指紋圖譜，并與不同產(chǎn)地的半枝蓮藥材及其混淆品進(jìn)行了比較，利用相似度軟件對(duì)不同產(chǎn)地半枝蓮藥材間的差異進(jìn)行了研究，對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)，方法重復(fù)性和精密度良好，有助于半枝蓮藥材的標(biāo)準(zhǔn)化種植及質(zhì)量控制。 二、半枝蓮中黃酮類(lèi)成分的含量測(cè)定 目的：建立

4、高效液相色譜法測(cè)定半枝蓮中6種黃酮類(lèi)成分的含量，同時(shí)測(cè)定各樣品中總黃酮的含量，為半枝蓮藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有效手段和依據(jù)。 方法： 1.六種黃酮類(lèi)成分同時(shí)測(cè)定(1)提取：比較不同提取方法、提取溶劑及提取時(shí)間的提取效果，選擇提取高的提取條件。(2)色譜條件：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，使各待測(cè)成分色譜峰的分離度均符合測(cè)定的要求。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以峰面積為縱

5、坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。(4)檢測(cè)限試驗(yàn)：將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋?zhuān)?dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。(5)精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算儀器精密度；取同一樣品，每日精密稱(chēng)取6份，制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)測(cè)定3日。根據(jù)測(cè)定結(jié)果分別計(jì)算日內(nèi)精密度和日間精密度。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液分別于0、2、4．6、8、24h進(jìn)樣測(cè)定。(7)回收率試驗(yàn)：取已知含量的藥材9份，每

6、份約O．1g，精密稱(chēng)定，分別精密加入一定量的對(duì)照品，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定高、中、低3種濃度的回收率。(8)樣品測(cè)定：在上述色譜條件下，測(cè)定不同來(lái)源半枝蓮藥材中各待測(cè)成分的含量。 2.總黃酮的測(cè)定(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定吸光度；以野黃芩苷的濃度(mg·mL<'-1>)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)樣品測(cè)定：依法制備各供試品溶液，測(cè)定所有半枝蓮藥材中總黃酮的含量。

7、 結(jié)論：本研究首次建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定半枝蓮中六種黃酮類(lèi)成分的含量。采用波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換法以各待測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為相應(yīng)組分的檢測(cè)波長(zhǎng)，提高了檢測(cè)靈敏度，方法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，精密度和穩(wěn)定性良好，可用于半枝蓮中黃酮類(lèi)成分的質(zhì)量控制。 三、半枝蓮中原兒茶酸的含量測(cè)定。 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定半枝蓮中原兒茶酸的含量，為半枝蓮藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有效手段。 方法：(1)提?。罕容^不同的提取方法，

8、并對(duì)各種影響因素進(jìn)行考察，選擇最佳的提取條件。(2)色譜條件：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，使原兒茶酸色譜峰的分離符合測(cè)定的要求。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的原兒茶酸對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以原兒茶酸的含量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積(×10<'7>)為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。(4)檢測(cè)限試驗(yàn)：將原兒茶酸對(duì)照品溶液逐步稀釋?zhuān)?dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液分別放置0、2、4、6、8、12

9、、24h后進(jìn)樣測(cè)定峰面積。(6)精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。(7)重復(fù)性試驗(yàn)：．取半枝蓮藥材平行制備樣品溶液6份，測(cè)定峰面積，計(jì)算各供試品溶液中原兒茶酸含量，求得其RSD。(8)回收率試驗(yàn)：取已知原兒茶酸含量的半枝蓮藥材，分別加入適量的原兒茶酸對(duì)照品，各平行制備同一濃度的樣品6份。(9)樣品測(cè)定：在上述色譜條件下，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到各個(gè)樣品中原兒茶酸的含量。 結(jié)論：本文首次建立了高效液相色譜法測(cè)定半枝

10、蓮中原兒茶酸含量的方法。該法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，精密度和穩(wěn)定性良好，可用于半枝蓮中原兒茶酸的質(zhì)量控制。 一、注射用銀杏葉提取物指紋圖譜研究 目的：建立注射用銀杏葉提取物的HPLC指紋圖譜，獲得對(duì)照?qǐng)D譜，并與不同批次指紋特征相比較，有效控制注射用銀杏葉提取物的質(zhì)量。 方法：(1)色譜條件：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，選擇最佳的色譜條件，使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。(2)系統(tǒng)適用

11、性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中參照物蘆丁峰的分離度和理論板數(shù)。(3)專(zhuān)屬性試驗(yàn)：精密吸取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液及對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，記錄75min內(nèi)的色譜圖。(4)精密度試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的相似度。(5)重復(fù)性試驗(yàn)：取平均裝量項(xiàng)下內(nèi)容物6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的相似度。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液分別于0、

12、2、4、6、8、24h進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積，同時(shí)比較所得指紋圖譜的相似度。(7)指紋圖譜的建立：分別取原料、中間體及注射用銀杏葉提取物各10批制備供試品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析。(8)數(shù)據(jù)分析：運(yùn)用相似度軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)論：本文建立了注射用銀杏葉提取物的HPLC-UV指紋圖譜，并與不同批次進(jìn)行了比較，利用相似度軟件對(duì)不同批次注射用銀杏葉提取物藥材間的差異進(jìn)行了研究，方法重復(fù)性和精密度良好，有助于注射用銀杏葉提取物

13、的質(zhì)量控制。 二、注射用銀杏葉提取物總黃酮醇苷的含量測(cè)定 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定注射用銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量，為注射用銀杏葉提取物的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有效手段。 方法：(1)色譜條件：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的配比，使各待測(cè)成分色譜峰的分離度均符合測(cè)定的要求。(2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在已確定的色譜條件下，考察色譜圖中各待測(cè)物峰的分離度，按槲皮素峰計(jì)算理論板數(shù)。I(3)專(zhuān)屬性試驗(yàn)：精密吸取陰性對(duì)照溶液、供

14、試品溶液及對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，記錄45min內(nèi)的色譜圖。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。(5)檢測(cè)限試驗(yàn)：將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋?zhuān)?dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。(6)精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次．測(cè)定峰面積。(7)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。(8)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液分別于0、2、

15、4、6、8、24h進(jìn)樣測(cè)定。(9)回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，每份約0.22g，精密稱(chēng)定，分別精密加入一定量的對(duì)照品，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。(10)樣品測(cè)定：取原料、中間體及注射用銀杏葉提取物各10批分別制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。 結(jié)論：本研究采用高效液相色譜法測(cè)定了注射用銀杏葉提取物黃酮類(lèi)成分的含量。方法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，精密度和穩(wěn)定性良好，可用于注射用銀杏葉提取物中黃酮類(lèi)成分的質(zhì)量控制。

16、 三、注射用銀杏葉提取物萜類(lèi)內(nèi)酯的含量測(cè)定 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定注射用銀杏葉提取物中萜類(lèi)內(nèi)酯的含量，為注射用銀杏葉提取物的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有效手段。 方法：(1)選用合適的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，使各待測(cè)成分色譜峰的分離度均符合測(cè)定的要求。(2)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在己確定的色譜條件下，考察色譜圖中各待測(cè)物峰的分離度，按白果內(nèi)酯峰計(jì)算理論板數(shù)。(3)專(zhuān)屬性試驗(yàn)：精密吸取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液及對(duì)照品

17、溶液，進(jìn)樣，記錄25min內(nèi)的色譜圖。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積；以峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，以濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。(5)檢測(cè)限試驗(yàn)：將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋?zhuān)?dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為檢測(cè)限。(6)精密度試驗(yàn)：取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。(7)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。(8)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液分別于0、2、4、6、