抑制吲哚胺2，3-雙加氧酶活性促進慢性粒細胞白血病源樹突狀細胞的功能.pdf

1、目的: 樹突狀細胞(dendritic cell，DC)因其強大的抗原提呈功能和激活抗原特異性CTL(cytotoxic T lymphocytes)反應，成為腫瘤免疫治療的重要載體。以DC為基礎誘導的特異性抗腫瘤免疫治療也成為腫瘤生物治療領(lǐng)域的研究熱點，白血病細胞來源的DC因攜帶自身腫瘤抗原在白血病免疫治療中倍受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)白血病來源的DC與正常DC相比，其表面分子表達相似，但抗原提呈功能較弱。吲哚胺2，3-雙加氧酶(ind

2、oleamine2，3-dioxygenase，IDO)是色氨酸分解代謝所必需的限速酶，在體內(nèi)分布比較廣泛。由于IDO的活化，使得游離的色氨酸減少以及色氨酸代謝產(chǎn)物的增加，導致細胞周期停滯、T細胞無應答，以及誘導調(diào)節(jié)性T細胞(CD4+ CD25+ regulatory T cell，Treg)的產(chǎn)生。已證實IDO有免疫負調(diào)節(jié)作用并參與腫瘤免疫逃逸。隨著慢性粒細胞性白血病源樹突狀細胞(dendritic cells derived fro

3、m chronic myeloid leukemia，CML-DCs)的成熟，IDO表達明顯上調(diào)，因此我們設想能否通過抑制CML-DCs中IDO的活性以增強CML-DCs的免疫刺激功能。 方法: 采集初治慢性粒細胞性白血病(CML)慢性期患者的骨髓，分離單個核細胞(mononuclear cells，MNCs)，采用人rhGM-CSF和rhIL-4細胞因子組合先將CML-MNCs誘導分化為不成熟DC(imDC)，再加用T

4、NF-a進一步使其成熟(mDC)。RT-PCR檢測CML-DCs中的IDO-mRNA的表達情況。流式細胞儀檢測CML-DCs免疫表型。在有或無IDO抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)作用下，分別以不成熟CML-DCs(imDC)和成熟CML-DCs(mDC)為刺激細胞，完全緩解期(complete remission，CR)CML患者外周T淋巴細胞為反應細胞建立混合淋巴細胞反應體系，ELISA法檢測CML-DCs上清液IL-12水平，MT

5、T法檢測CML-DCs刺激自體T淋巴細胞的增殖能力。 結(jié)果: 慢性粒細胞性白血病骨髓單個核細胞經(jīng)體外擴增后，具有典型的樹突狀形態(tài)特征，經(jīng)染色體檢查證實了其慢粒源性。RT-PCR檢測成熟DCs和不成熟DCs中IDO mRNA的表達，顯示隨著CML-DCs的誘導分化和成熟，IDO-mRNA的表達不斷增高；經(jīng)TNF-a誘導的DCs的免疫表型除CD1a外，CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表達明顯上調(diào)(P<0.05)，

6、上述表達不受1-MT的影響。應用1-MT抑制IDO活性后的不成熟DCs和成熟DCs，其分泌IL-12水平均明顯增高(P<0.05，P<0.01)，且激發(fā)自體T淋巴細胞增殖的能力均明顯增強(P<0.05，P<0.01)。 結(jié)論: 本實驗結(jié)果顯示，隨著慢性粒細胞白血病源性樹突狀細胞誘導和分化的成熟，具有免疫負調(diào)節(jié)作用的IDO其表達不斷升高。抑制慢性粒細胞性白血病源性樹突狀細胞中IDO的活性可提高慢性粒細胞白血病源性樹突狀細胞