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文檔簡介
1、目的:來自現(xiàn)代生活中各個方面的壓力常使人們處于應(yīng)激狀態(tài)中。適當?shù)膽?yīng)激可以促進機體的進化與發(fā)展,被稱為良性應(yīng)激;如果機體長期處于應(yīng)激所致的異常興奮狀態(tài),則會造成多個系統(tǒng)功能紊亂并引發(fā)應(yīng)激性疾病,甚至導致死亡,此時的應(yīng)激就成為對人體有害的惡性應(yīng)激。因此,對于良性應(yīng)激與惡性應(yīng)激的區(qū)分及其客觀評價標準越來越受到人們的關(guān)注。本文通過對慢性復合應(yīng)激狀態(tài)下小鼠體重、生存時間、血清中必需元素及多項生化指標水平、耐缺氧能力及免疫組織病理結(jié)構(gòu)等指標的觀察,
2、探討應(yīng)激對機體多個系統(tǒng)功能的影響,并試圖找出可以區(qū)分良、惡性應(yīng)激的量化指標。同時本實驗還將慢性應(yīng)激所致的相應(yīng)指標的變化與應(yīng)激相關(guān)基因多態(tài)性相關(guān)聯(lián),以探索慢性應(yīng)激致機體系統(tǒng)功能可能的遺傳學原因。 方法:采用束縛、懸尾、水浸三種應(yīng)激源共同作用建立慢性復合應(yīng)激動物模型,并從以下幾個方面研究慢性應(yīng)激對機體產(chǎn)生的影響。 1.通過分析慢性復合應(yīng)激后小鼠體重的變化,對本實驗動物模型的建立進行評價。 2.在實施慢性復合應(yīng)激過程中
3、,記錄各組小鼠每日體重變化及其生存時間,并在應(yīng)激組與對照組之間以及應(yīng)激組內(nèi)各亞組之間進行比較,分析體重與生存時間之間的關(guān)系。 3.通過檢測慢性復合應(yīng)激后小鼠血清中葡萄糖、白蛋白、總蛋白、肌酐及堿性磷酸酶等生化指標水平,研究慢性復合應(yīng)激對各項臨床生化指標的影響。 4.采用SSP-PCR技術(shù)檢測以MudoEb5和MudoEb7為代表的小鼠H2-Eb位點等位基因的多態(tài)性,同時分析H2-Eb等位基因多態(tài)性對慢性復合應(yīng)激所致的小鼠
4、血清生化指標變化的影響。 5.采用原子吸收分光光度法檢測小鼠血清中鈣、鎂、鋅三種元素含量,研究慢性復合應(yīng)激狀態(tài)下這些元素的代謝變化情況。 6.通過常壓耐缺氧試驗評估耐小鼠缺氧能力。比較應(yīng)激組與對照組小鼠間體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧時間,同時,將上述指標變化與H2-Eb等位基因多態(tài)性相關(guān)聯(lián),從基因?qū)W上研究慢性復合應(yīng)激所產(chǎn)生的影響。 7.采用透射電子顯微鏡技術(shù)觀察慢性復合應(yīng)激后小鼠胸腺組織細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,試圖從細胞形態(tài)
5、學上研究慢性復合應(yīng)激對機體免疫器官的影響及其可能機制。 8.通過電擊跳臺實驗對慢性復合應(yīng)激后小鼠的學習記憶能力進行評價,分析慢性復合應(yīng)激對機體行為智力的影響。 結(jié)果: 1.兩組小鼠間初始體重分別為20.330±2.237和19.883±1.575(g),兩者間沒有顯著性差異,P>0.05;應(yīng)激組小鼠在應(yīng)激第9天時發(fā)生第1例死亡,因此比較兩組小鼠應(yīng)激第8天體重,結(jié)果顯示,應(yīng)激組明顯低于對照組,P<0.05。
6、 2.應(yīng)激組第1至第21天體重(重復測量數(shù)據(jù))明顯低于對照組,P<0.05:應(yīng)激組內(nèi)亞組比較,小鼠的體重與其生存時間呈正比,且當應(yīng)激組小鼠的體重相對于對照組降低大于5.78%時,其生存時間中位數(shù)為13.5天;若降低小于5.78%時,生存時間中位數(shù)為>22天。 3.血清學生化指標結(jié)果:應(yīng)激組小鼠血糖、肌酐水平較對照組升高,血清白蛋白、總蛋白以及堿性磷酸酶水平則較對照組降低,兩組間各指標均有顯著性差異,P均<0.05。 4.
7、H2-Eb等位基因檢測結(jié)果:86只小鼠中,MudEb5型等位基因檢測的陽性有65只(陽性率為75.58%),MudoEb7型等位基因檢測的陽性有80只(陽性率為93.02%);MudoEb5型等位基因?qū)β詮秃蠎?yīng)激所致血清總蛋白、堿性磷酸酶水平的變化有顯著影響;MudoEb7等位基因型別對慢性復合應(yīng)激所致血清總蛋白、白蛋白及堿性磷酸酶水平的變化有顯著影響。 5.應(yīng)激組血清中鈣、鎂、鋅元素含量均較對照組降低,其中鎂和鋅含量減少有顯
8、著性差異,P<0.05;應(yīng)激組血清中三種元素兩兩間均沒有顯著相關(guān)性,P>0.05。 6.應(yīng)激組小鼠體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧能力均低于對照組,且具有顯著性差異,P<0.05; MudoEb5型等位基因?qū)?yīng)激所致體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧能力變化具有顯著影響;MudoEb7型等位基因?qū)?yīng)激所致體重、脾臟指數(shù)變化有顯著影響。 7.透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)應(yīng)激組小鼠胸腺組織切片中出現(xiàn)大量典型的凋亡細胞形態(tài),而在對照組組織切片中則呈現(xiàn)正常的淋
9、巴細胞形態(tài)。 8.在不同時間時進行的跳臺實驗結(jié)果顯示,應(yīng)激組小鼠錯誤次數(shù)均明顯多于對照組,潛伏期均明顯短于對照組,P<0.05。 結(jié)論: 1.慢性復合應(yīng)激時小鼠體重增長明顯受抑,證明本實驗造模成功。 2.體重增長受慢性復合應(yīng)激抑制越明顯,則證明機體產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)越強烈,小鼠的生存時間越短;當應(yīng)激組小鼠體重相對于對照組,降低超過5.78%時,則提示該組小鼠有可能發(fā)生死亡。 3.慢性應(yīng)激對機體各項血清
10、生化指標水平均有影響,且MudoEb7型等位基因陽性表達可能與應(yīng)激狀態(tài)時血清白蛋白、總蛋白、堿性磷酸酶水平變化有關(guān);MudoEb5型等位基因陽性表達可能只與應(yīng)激狀態(tài)時血清總蛋白、堿性磷酸酶水平變化有關(guān)。 4.慢性復合應(yīng)激可導致小鼠血清中鎂和鋅含量顯著降低。 5.慢性復合應(yīng)激對小鼠生長、免疫功能以及機體耐缺氧能力有影響。在慢性復合應(yīng)激狀態(tài)下,MudoEb7型等位基因表達陽性的小鼠的體重、免疫功能變化比該基因位點表達陰性的小
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