慢性復(fù)合應(yīng)激對小鼠多個系統(tǒng)功能的影響及其與H2-Eb等位基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的：來自現(xiàn)代生活中各個方面的壓力常使人們處于應(yīng)激狀態(tài)中。適當(dāng)?shù)膽?yīng)激可以促進(jìn)機(jī)體的進(jìn)化與發(fā)展，被稱為良性應(yīng)激；如果機(jī)體長期處于應(yīng)激所致的異常興奮狀態(tài)，則會造成多個系統(tǒng)功能紊亂并引發(fā)應(yīng)激性疾病，甚至導(dǎo)致死亡，此時的應(yīng)激就成為對人體有害的惡性應(yīng)激。因此，對于良性應(yīng)激與惡性應(yīng)激的區(qū)分及其客觀評價標(biāo)準(zhǔn)越來越受到人們的關(guān)注。本文通過對慢性復(fù)合應(yīng)激狀態(tài)下小鼠體重、生存時間、血清中必需元素及多項(xiàng)生化指標(biāo)水平、耐缺氧能力及免疫組織病理結(jié)構(gòu)等指標(biāo)的觀察，

2、探討應(yīng)激對機(jī)體多個系統(tǒng)功能的影響，并試圖找出可以區(qū)分良、惡性應(yīng)激的量化指標(biāo)。同時本實(shí)驗(yàn)還將慢性應(yīng)激所致的相應(yīng)指標(biāo)的變化與應(yīng)激相關(guān)基因多態(tài)性相關(guān)聯(lián)，以探索慢性應(yīng)激致機(jī)體系統(tǒng)功能可能的遺傳學(xué)原因。 方法：采用束縛、懸尾、水浸三種應(yīng)激源共同作用建立慢性復(fù)合應(yīng)激動物模型，并從以下幾個方面研究慢性應(yīng)激對機(jī)體產(chǎn)生的影響。 1．通過分析慢性復(fù)合應(yīng)激后小鼠體重的變化，對本實(shí)驗(yàn)動物模型的建立進(jìn)行評價。 2．在實(shí)施慢性復(fù)合應(yīng)激過程中

3、，記錄各組小鼠每日體重變化及其生存時間，并在應(yīng)激組與對照組之間以及應(yīng)激組內(nèi)各亞組之間進(jìn)行比較，分析體重與生存時間之間的關(guān)系。 3．通過檢測慢性復(fù)合應(yīng)激后小鼠血清中葡萄糖、白蛋白、總蛋白、肌酐及堿性磷酸酶等生化指標(biāo)水平，研究慢性復(fù)合應(yīng)激對各項(xiàng)臨床生化指標(biāo)的影響。 4．采用SSP-PCR技術(shù)檢測以MudoEb5和MudoEb7為代表的小鼠H2-Eb位點(diǎn)等位基因的多態(tài)性，同時分析H2-Eb等位基因多態(tài)性對慢性復(fù)合應(yīng)激所致的小鼠

4、血清生化指標(biāo)變化的影響。 5．采用原子吸收分光光度法檢測小鼠血清中鈣、鎂、鋅三種元素含量，研究慢性復(fù)合應(yīng)激狀態(tài)下這些元素的代謝變化情況。 6．通過常壓耐缺氧試驗(yàn)評估耐小鼠缺氧能力。比較應(yīng)激組與對照組小鼠間體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧時間，同時，將上述指標(biāo)變化與H2-Eb等位基因多態(tài)性相關(guān)聯(lián)，從基因?qū)W上研究慢性復(fù)合應(yīng)激所產(chǎn)生的影響。 7．采用透射電子顯微鏡技術(shù)觀察慢性復(fù)合應(yīng)激后小鼠胸腺組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，試圖從細(xì)胞形態(tài)

5、學(xué)上研究慢性復(fù)合應(yīng)激對機(jī)體免疫器官的影響及其可能機(jī)制。 8．通過電擊跳臺實(shí)驗(yàn)對慢性復(fù)合應(yīng)激后小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行評價，分析慢性復(fù)合應(yīng)激對機(jī)體行為智力的影響。 結(jié)果： 1．兩組小鼠間初始體重分別為20．330±2．237和19．883±1．575（g），兩者間沒有顯著性差異，P>0．05；應(yīng)激組小鼠在應(yīng)激第9天時發(fā)生第1例死亡，因此比較兩組小鼠應(yīng)激第8天體重，結(jié)果顯示，應(yīng)激組明顯低于對照組，P<0．05。

6、 2．應(yīng)激組第1至第21天體重（重復(fù)測量數(shù)據(jù)）明顯低于對照組，P<0．05：應(yīng)激組內(nèi)亞組比較，小鼠的體重與其生存時間呈正比，且當(dāng)應(yīng)激組小鼠的體重相對于對照組降低大于5．78%時，其生存時間中位數(shù)為13．5天；若降低小于5．78%時，生存時間中位數(shù)為>22天。 3．血清學(xué)生化指標(biāo)結(jié)果：應(yīng)激組小鼠血糖、肌酐水平較對照組升高，血清白蛋白、總蛋白以及堿性磷酸酶水平則較對照組降低，兩組間各指標(biāo)均有顯著性差異，P均<0．05。 4．

7、H2-Eb等位基因檢測結(jié)果：86只小鼠中，MudEb5型等位基因檢測的陽性有65只（陽性率為75．58%），MudoEb7型等位基因檢測的陽性有80只（陽性率為93．02%）；MudoEb5型等位基因?qū)β詮?fù)合應(yīng)激所致血清總蛋白、堿性磷酸酶水平的變化有顯著影響；MudoEb7等位基因型別對慢性復(fù)合應(yīng)激所致血清總蛋白、白蛋白及堿性磷酸酶水平的變化有顯著影響。 5．應(yīng)激組血清中鈣、鎂、鋅元素含量均較對照組降低，其中鎂和鋅含量減少有顯

8、著性差異，P<0．05；應(yīng)激組血清中三種元素兩兩間均沒有顯著相關(guān)性，P>0．05。 6．應(yīng)激組小鼠體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧能力均低于對照組，且具有顯著性差異，P<0．05； MudoEb5型等位基因?qū)?yīng)激所致體重、脾臟指數(shù)及耐缺氧能力變化具有顯著影響；MudoEb7型等位基因?qū)?yīng)激所致體重、脾臟指數(shù)變化有顯著影響。 7．透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)應(yīng)激組小鼠胸腺組織切片中出現(xiàn)大量典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)，而在對照組組織切片中則呈現(xiàn)正常的淋

9、巴細(xì)胞形態(tài)。 8．在不同時間時進(jìn)行的跳臺實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)激組小鼠錯誤次數(shù)均明顯多于對照組，潛伏期均明顯短于對照組，P<0．05。 結(jié)論： 1．慢性復(fù)合應(yīng)激時小鼠體重增長明顯受抑，證明本實(shí)驗(yàn)造模成功。 2．體重增長受慢性復(fù)合應(yīng)激抑制越明顯，則證明機(jī)體產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)越強(qiáng)烈，小鼠的生存時間越短；當(dāng)應(yīng)激組小鼠體重相對于對照組，降低超過5．78%時，則提示該組小鼠有可能發(fā)生死亡。 3．慢性應(yīng)激對機(jī)體各項(xiàng)血清

10、生化指標(biāo)水平均有影響，且MudoEb7型等位基因陽性表達(dá)可能與應(yīng)激狀態(tài)時血清白蛋白、總蛋白、堿性磷酸酶水平變化有關(guān)；MudoEb5型等位基因陽性表達(dá)可能只與應(yīng)激狀態(tài)時血清總蛋白、堿性磷酸酶水平變化有關(guān)。 4．慢性復(fù)合應(yīng)激可導(dǎo)致小鼠血清中鎂和鋅含量顯著降低。 5．慢性復(fù)合應(yīng)激對小鼠生長、免疫功能以及機(jī)體耐缺氧能力有影響。在慢性復(fù)合應(yīng)激狀態(tài)下，MudoEb7型等位基因表達(dá)陽性的小鼠的體重、免疫功能變化比該基因位點(diǎn)表達(dá)陰性的小