穴位埋藥對(duì)腦缺血再灌注大鼠海馬腫瘤壞死因子和核因子-κB的影響.pdf

1、目的： 在目前針灸治療中風(fēng)病的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究基礎(chǔ)制備膠原川芎嗪緩釋劑，研究在大椎、雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴位埋藥對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及核因子-κB(NF-κB)的調(diào)節(jié)作用。 方法：選用健康SD大鼠160只，隨機(jī)分為6組：正常組10只，假手術(shù)組30只(24h組、72h組，120h組各10只)，模型組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，腹腔注射組30只(24h組、72h組、1

2、20h組各10只)，電針組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，穴位埋藥組30只(24h組、72h組、120h組各10只)。采用大腦中動(dòng)脈線栓法(MACO)制備缺血再灌注模型，以膠原川芎嗪制備的緩釋劑(藥線)在大椎、雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴位埋藥。每組中分別取各組各時(shí)相大鼠4只直接斷頭取海馬用放射免疫法檢測(cè)TNF-α的含量和用蛋白免疫印跡法檢測(cè)NF-κB-p65蛋白含量；另外6只大鼠以10％水合氯醛麻醉，4℃的4％多聚甲醛200ml(含0

3、.1％DEPC)經(jīng)心臟灌注，迅速取腦，在視交叉平面前后2mm處將腦冠狀切面切開，留取中間部分置于4℃的4％多聚甲醛固定液中過夜。將固定后的腦組織進(jìn)行石蠟包埋。用免疫組化法檢測(cè)缺血海馬區(qū)NF-κB表達(dá)的變化。采用HPIAS-1000計(jì)算機(jī)高清晰彩色圖像分析儀對(duì)切片進(jìn)行圖像分析，所有結(jié)果有SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： 1.大腦中動(dòng)脈缺血再灌注可明顯損害大鼠的正常行為活動(dòng)。穴位埋藥、電針，腹腔注射組腦缺血再

4、灌注大鼠神經(jīng)體征均有明顯改善，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其中穴位埋藥能明顯改善腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)體征(與腹腔注射組比較，P<0.01；與電針組比較，P<0.05)。 2.放射免疫結(jié)果顯示腦缺血再灌注模型24h組大鼠海馬組織TNF-α含量即明顯升高達(dá)到峰值，之后逐漸下降，與正常組，假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.01)；治療各組大鼠缺血側(cè)海馬組織TNF-α含量均有所降低，與模型組同時(shí)相比較有顯著意

5、義(P<0.01)，并隨時(shí)間的推移逐漸趨于正常。穴位埋藥組治療效果明顯優(yōu)于腹腔注射組和電針組(P<0.01)． 3.免疫組化及蛋白免疫印跡法結(jié)果顯示：模型各組大鼠缺血側(cè)海馬CAI區(qū)NF-kB-p65蛋白表達(dá)顯著升高，與正常組和假手術(shù)組比較有極顯著差異(P<0.01)，且隨再灌注時(shí)間而發(fā)生變化，72h表達(dá)達(dá)高峰，NF-kB移位于核明顯；治療各組大鼠缺血側(cè)海馬組織NF-kB-p65蛋白表達(dá)均有所降低，與同時(shí)相模型組比較有顯著意義(P

6、<0.01)。模型各組大鼠缺血側(cè)海馬組織NF-k B-p65蛋白含量升高，與正常組和假手術(shù)組比較有一定差異，在72h其含量明顯升高；治療各組大鼠缺血側(cè)海馬NF-kB-p65蛋白含量均有所降低，與同時(shí)相模型組比較有顯著性差異(P<0.05)；并隨時(shí)間的推移逐漸趨于正常。其中穴位埋藥組降低NF-kB-p65蛋白水平的效果明顯優(yōu)于電針組和腹腔注射組(P<0.05)。 結(jié)論： 大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后缺血側(cè)海馬組織中TNF-