幼鼠腸缺血-再灌注損傷中腫瘤壞死因子的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文幼鼠腸缺血再灌注損傷中腫瘤壞死因子的實驗研究姓名：李春艷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：于明2000.4.1分鐘組(1120’G)。3標(biāo)本采集及處理：(1)腸管、肝組織置于10％福爾馬林液中固定。(2)經(jīng)殷動脈、門靜脈取血離心，血清于70℃冰箱保存。(3)肝、腸組織取材后放人DEPC處理過的Eppendor[管中后置于一70℃冰箱保存。實驗方法1檢測方法：1)免疫組織化學(xué)法：腸、肝組織常規(guī)固定，石蠟包埋，

2、切片，用羊抗TNF—a多克隆抗體和過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素(SP)染色試劑盒檢測TNF—n蛋白陽性細(xì)胞存在。2)病理組織學(xué)：腸組織切片進(jìn)行蘇木素一伊紅染色(HE)，觀察不同I／R時點腸組織病理變化。3)放射免疫法：根據(jù)待測樣品TNF一0t和1125標(biāo)記TNFa競爭性與特異性抗體相結(jié)合原理，采用液相競爭放射免疫法檢測血清中TNF—a的濃度。4)RT—PCR半定量測定：用TRI—ZOL總RNA提取試劑提取腸組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA

3、第一鏈，分別擴增TNF—a、c—losPCR產(chǎn)物，檢測腸組織TNF—amRNA、c—losmRNA表達(dá)。2結(jié)果判定及數(shù)據(jù)處理：1)免疫組織化學(xué)結(jié)果半定量判定：陽性強度按顯色深度和陽性顆粒的大小、數(shù)量分為陰性(一)、可疑()、陽性()、強陽性()、極強陽性(H～抖持)。2腸組織HE染色后腸粘膜損傷按Chiu氏六級評分評價。3)樣品血清濃度用Xs表示，組問樣本均數(shù)進(jìn)行t檢驗。4)以內(nèi)參照值標(biāo)準(zhǔn)化TNF—a、c—los值，得到TNF—a、c—