羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究羥基喜樹(shù)堿能否通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡。 方法：體外培養(yǎng)人口腔鱗癌細(xì)胞株-KB細(xì)胞，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不同實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)羥基喜樹(shù)堿濃度采用不同分組方式。KB細(xì)胞經(jīng)羥基喜樹(shù)堿處理后，利用MTT試驗(yàn)檢測(cè)羥基喜樹(shù)堿的細(xì)胞毒性作用，計(jì)算羥基喜樹(shù)堿對(duì)KB細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率和半抑制濃度(IC50)，并繪制生長(zhǎng)抑制曲線(xiàn)。Hoechst 33258染色和流式細(xì)胞術(shù)分別對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行定性和定量研究，western b

2、lot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和Bel-2蛋白以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異蛋白GRP78蛋白的表達(dá)情況，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)GRP78蛋白在細(xì)胞中的定位和轉(zhuǎn)位情況。數(shù)據(jù)均以x±s表示，利用SPSS10.0進(jìn)行單因素方差分析。 結(jié)果：羥基喜樹(shù)堿對(duì)KB細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用，隨羥基喜樹(shù)堿濃度的升高毒性作用逐漸增強(qiáng)，24h和48h羥基喜樹(shù)堿的 IC50分別為 2.43 μg/ml 和 0.072 μg/ml。Hoechst 33258

3、染色后，對(duì)照組細(xì)胞核多呈圓形或橢圓形，可見(jiàn)少量核分裂象，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核著色程度不一，可見(jiàn)典型凋亡細(xì)胞核型，胞核呈致密固縮或碎塊狀濃染。羥基喜樹(shù)堿作用于KB細(xì)胞48h后，隨其濃度的升高，各組細(xì)胞凋亡率逐漸升高，WesternBlot 結(jié)果提示Caspase-3 蛋白和GRP78蛋白表達(dá)增高，Bel-2蛋白表達(dá)降低，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較均有顯著性差異(P<0.05)。正常情況下，GRP78蛋白表達(dá)定位于KB細(xì)胞的胞漿，部分區(qū)域濃聚。KB細(xì)胞經(jīng)

4、羥基喜樹(shù)堿刺激后，GRP78蛋白開(kāi)始出現(xiàn)胞漿高表達(dá)，隨著藥物濃度的升高，逐漸向核周濃聚，最后定位于細(xì)胞核。 結(jié)論：1、羥基喜樹(shù)堿對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，呈劑量依賴(lài)關(guān)系。2、羥基喜樹(shù)堿能誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡。3、羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡過(guò)程中Caspase-3 蛋白表達(dá)增高、Bcl-2 蛋白表達(dá)下降。4、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的過(guò)程。5、GRP78蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中的真正作用有待于進(jìn)