VEGF-165與Matrigel基底膜基質(zhì)模擬神經(jīng)新生微環(huán)境對(duì)海馬神經(jīng)干細(xì)胞的作用.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)干細(xì)胞移植為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷提供了新的治療途徑，但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，外源性神經(jīng)干細(xì)胞移植存在著神經(jīng)于細(xì)胞存活率低，向神經(jīng)元分化較少等問(wèn)題。而血管-神經(jīng)新生的概念以及神經(jīng)新生微環(huán)境的提出為解決這些問(wèn)題提供了新的方向。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)新生大鼠提取神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)為基礎(chǔ)，探討VEGF-165與Matrigel基底膜基質(zhì)模擬神經(jīng)新生微環(huán)境對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的作用。
　　研究方法：
　　本次研究以新生24小時(shí)內(nèi)的

2、SD大鼠為神經(jīng)干細(xì)胞供體，通過(guò)提取海馬組織中神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并以巢蛋白nestin免疫組化染色進(jìn)行鑒定。將培養(yǎng)成功的神經(jīng)干細(xì)胞分別接種于多聚賴氨酸包被的24孔板和Matrigel基底膜基質(zhì)中，并分別給予正常神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，胎牛血清誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，VEGF-165誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基和VEGF+血清誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)分化一周后通過(guò)免疫熒光染色法，對(duì)誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行nestin蛋白、β-tubulinⅢ蛋白和GFAP

3、蛋白檢測(cè)，觀察各誘導(dǎo)組的三種蛋白陽(yáng)性細(xì)胞比例，并對(duì)比Matrigel基底膜基質(zhì)應(yīng)用前后的細(xì)胞分化情況，以明確VEGF-165和Matrigel基底膜基質(zhì)的應(yīng)用以及兩者聯(lián)合作用對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng):經(jīng)新生大鼠海馬組織進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞提取，經(jīng)體外培養(yǎng)1周后形成約幾百細(xì)胞形成的細(xì)胞球，經(jīng)胰酶與機(jī)械分離法結(jié)合將細(xì)胞球吹散以進(jìn)行傳代，傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可穩(wěn)定傳代。行nestin免疫組化染色

4、后，培養(yǎng)所的細(xì)胞球絕大多數(shù)染色呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。因此，經(jīng)新生大鼠海馬區(qū)提取培養(yǎng)所得的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞。
　　2.VEGF-165誘導(dǎo)分化:通過(guò)不同的培養(yǎng)基配置方案誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，可以得出VEGF-165對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)分化的大致作用，即促VEGF-165在神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化中可起調(diào)控作用，能促進(jìn)NSCs的增殖與分化，并可能存在誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元方向分化作用。因此，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)可能是神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分

5、化的促進(jìn)因素，對(duì)于研究神經(jīng)干細(xì)胞生成及分化具有重要意義。
　　3.Matrigel基底膜基質(zhì)與VEGF-165聯(lián)合作用:Matrigel基底膜基質(zhì)可以為神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化提供理想的三維立體培養(yǎng)環(huán)境，并能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的分化，與VEGF-165聯(lián)合應(yīng)用可以提高神經(jīng)元的分化比例，且使細(xì)胞間形成更近似于在體組織的結(jié)構(gòu)，對(duì)于神經(jīng)再生有著重要意義。
　　結(jié)論：
　　利用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF-165)和Matrigel基底