IGF-I促進(jìn)急性眼外肌損傷修復(fù)的研究.pdf

1、急性眼外肌損傷是長(zhǎng)期困擾眼科醫(yī)師和患者的常見(jiàn)眼疾。主要是由于肌肉，神經(jīng)和血管等原因?qū)е碌募毙匝弁饧∵\(yùn)動(dòng)受限，臨床表現(xiàn)為復(fù)視和代償頭位，嚴(yán)重影響正常生活和工作。早期正確診斷和及時(shí)的藥物治療是恢復(fù)眼外肌損傷的重要途徑。目前，多數(shù)是針對(duì)病因和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物治療，且療效有限。同時(shí)，由于尚無(wú)穩(wěn)定和可重復(fù)的急性眼外肌損傷動(dòng)物模型，制約了急性眼外肌損傷的基礎(chǔ)和臨床研究，尤其是藥物的治療和研發(fā)。
　　胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(insulin like

2、growth factor-1，IGF-I)從發(fā)現(xiàn)到現(xiàn)在已經(jīng)有52年了，具有廣泛的生物學(xué)作用，是一類(lèi)既有合成代謝功能，又有生長(zhǎng)促進(jìn)作用的多肽。研究表明，IGF-I在肌肉的損傷后修復(fù)愈合過(guò)程中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用。
　　因此，制備穩(wěn)定和可重復(fù)的急性眼外肌損傷動(dòng)物模型，并在眼外肌損傷后給予促進(jìn)急性眼外肌修復(fù)與再生的藥物（IGF-I）干預(yù)，不僅為深入研究眼外肌損傷的發(fā)病機(jī)制和藥物防治提供重要模型，也為藥物防治急性眼外肌損傷探索了新的

3、途徑。
　　目的：
　　1.探討用鉗夾法制備急性眼外肌損傷模型，為研究急性眼外肌損傷的機(jī)制和治療方法打下基礎(chǔ)；
　　2．觀察IGF-I促進(jìn)急性眼外肌損傷修復(fù)的作用，探索治療急性眼外肌損傷的新方法。
　　方法：
　　1.建立急性眼外肌鉗夾傷模型：成年雄性新西蘭白兔24只，隨機(jī)分為A、B、C三組，每組8只。左眼常規(guī)消毒后，打開(kāi)結(jié)膜囊，暴露上直肌，以20cm反向鉗（鉗夾力約1200g）分別在左眼上直肌近附著點(diǎn)處鉗

4、夾5min（A）、10min（B）、20min（C）作為實(shí)驗(yàn)組，右眼上直肌不做任何處理作為對(duì)照組（D）。術(shù)后于第7d處死兔子，分離雙眼上直肌，在肌肉松弛狀態(tài)下，在距離附著點(diǎn)大于1cm處剪斷肌肉一端，再將肌肉于另一端即附著點(diǎn)處離斷，每組各取4條肌肉HE染色組織病理學(xué)觀察。每組另取4條肌肉貫穿縫合結(jié)扎固定，一端埋置刺激電極，另一端以4-0絲線肌肉張力換能器的傳感器上并接于計(jì)算機(jī)，分別在40HZ、100HZ、200HZ電刺激下測(cè)量肌力。

5、>　　2.IGF-I促進(jìn)急性眼外肌損傷修復(fù)作用的觀察：按照肌肉運(yùn)動(dòng)損傷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)確定眼外肌輕、中、重度損傷所需的鉗夾時(shí)間。成年雄性新西蘭白兔18只，隨機(jī)分為E,F,G三組，每組6只，以反向鉗分別鉗夾雙眼上直肌10min，左眼上直肌在鉗夾后即刻肌內(nèi)注射IGF-I（5ug）作為實(shí)驗(yàn)組，右眼上直肌肌內(nèi)注射等量的生理鹽水作為對(duì)照組(H)，分別于第4d(E)、7d(F)、14d(G)各處死6只兔子，取雙眼上直肌分別進(jìn)行肌力測(cè)定、HE染色組織病理學(xué)觀

6、察，免疫組化ABC法觀察增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)A、B、C各組上直肌較對(duì)照組有不同程度的肌纖維斷裂、壞死和肌漿融解，在40×10光鏡下橫切面肌纖維計(jì)數(shù)結(jié)果（個(gè)/400倍光鏡視野）分別為：A：45.25±3.54，B：34.00±3.53,C：17.83±3.19，D：61.25±4.89，實(shí)驗(yàn)各組肌

7、纖維數(shù)量較對(duì)照組分別減少26.12％(A,P＜0.05)、44.49％(B,P＜0.01)、71.76％(C,P＜0.01)，鉗夾時(shí)間越長(zhǎng)損傷程度越嚴(yán)重，5min、10min、20min組損傷程度分別符合肌肉損傷Ⅱ輕度、中度、重度標(biāo)準(zhǔn)。各組肌力測(cè)量結(jié)果（mN/cm2）分別為：為40HZ：A（83.00±4.80），B（81.83±3.97），C（83.58±2.61）,D(92.67±2.71)；100HZ：A（227.25±7.02）

8、，B（223.00±4.79），C（217.25±4.05），D（229.08±5.55）；200HZ：A（290.42±6.60），B（285.75±9.35），C（283.75±5.01），D（295.25±6.88）。實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、在IGF-I的實(shí)驗(yàn)中，HE染色組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，在40×10倍物鏡視野肌纖維計(jì)數(shù)結(jié)果（單位：個(gè)/400倍光鏡視野）實(shí)驗(yàn)組分別為E：39.06±3.87，F(xiàn)：39.7

9、2±3.75；G：39.50±2.87，對(duì)照組分別為E:33.94±3.11，F(xiàn):34.83±3.13，G:35.50±2.98。E、F、G實(shí)驗(yàn)組肌纖維數(shù)量較對(duì)照組分別增加15.09％、14.04％、11.27％，實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組肌力測(cè)量結(jié)果（mN/cm2）分別為40HZ實(shí)驗(yàn)組分別為：E（86.44±6.44），F(xiàn)（87.78±5.19），G（84.56±6.46）,40HZ對(duì)照組分別為E(85.67±

10、7.25),F(82.00±6.04),G(83.11±4.78)；100HZ實(shí)驗(yàn)組分別為：E（228.11±10.71），F(xiàn)（223.44±11.57），G（225.44±8.22）,100HZ對(duì)照組分別為E(226.78±3.60),F(223.44±11.57),G(228.89±5.58)；200HZ實(shí)驗(yàn)組分別為：E（300.56±14.55），F(xiàn)（296.89±15.10），G（277.78±17.41）,200HZ對(duì)照組分別

11、為E(300.11±12.72),F(286.11±12.81),G(288.11±12.39)。實(shí)驗(yàn)各組肌力較對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組在鏡下PCNA染色切片上均可見(jiàn)有多少不等棕黃色的核存在。各組PCNA陽(yáng)性核計(jì)數(shù)（個(gè)/400倍光鏡視野）分別為實(shí)驗(yàn)組E（106.72±9.82）、F（104.39±9.85）、G（71.94±8.33）；對(duì)照組分別為E（63.17±4.77）、F（65.56±5.67）、G（59.56±6.45）。實(shí)驗(yàn)組

12、較對(duì)照組PCNA表達(dá)顯著增多E(P＜0.01)、F(P＜0.01)、G(P＞0.05)，實(shí)驗(yàn)組中E、F組PCNA表達(dá)高于G組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、鉗夾法可以導(dǎo)致眼外肌急性Ⅱ度損傷，可作為急性眼外肌損傷模型的制備方法。
　　2、IGF-I在眼外肌急性損傷后能夠保護(hù)受損肌肉組織，增加損傷后肌纖維的存活數(shù)量，促進(jìn)損傷組織的增生與分化，有利于損傷后的修復(fù)和愈合。
　　創(chuàng)新點(diǎn)：
　　1.首次利用鉗夾