硫化氫介導(dǎo)的大鼠大腦中動(dòng)脈的EDHF舒張反應(yīng)及其在腦缺血再灌注過(guò)程中的變化.pdf

1、生理狀況下,血管內(nèi)皮通過(guò)生成和釋放內(nèi)皮源性的舒張因子,如一氧化氮(nitric oxide,NO)、前列環(huán)素(prostacyclin,PGI2)及內(nèi)皮源性超極化因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor,EDHF),在維持血管穩(wěn)態(tài)方面起著重要的作用。它們和內(nèi)皮素﹑血栓素A2(TXA2)等血管收縮因子共同作用,調(diào)節(jié)血管局部的緊張程度和血流量,其中NO和PGI2發(fā)現(xiàn)較早,其性質(zhì)和作用機(jī)制均得

2、到廣泛而且深入的研究,但有關(guān)EDHF,尤其是EDHF在腦血管中的作用研究還很少。
　　硫化氫(H2S)長(zhǎng)期以來(lái)一直是被看成是對(duì)機(jī)體有害的氣體分子。研究表明H2S是機(jī)體氣體信號(hào)家族中的重要的一員,與NO、一氧化碳(CO)一起被稱(chēng)為“三人執(zhí)政”。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,合成H2S的酶主要有胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)。

3、現(xiàn)普遍認(rèn)為CSE是心血管系統(tǒng)中產(chǎn)生H2S的唯一的酶。在血管中,CSE不僅在血管平滑肌細(xì)胞中表達(dá),在血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有表達(dá)。本文現(xiàn)對(duì)H2S在大鼠大腦中動(dòng)脈(middle cerebral artery,MCA)中是否具有EDHF樣作用進(jìn)行了研究。
　　目的:
　　1.探討H2S是否介導(dǎo)大鼠MCA中EDHF舒張反應(yīng)。
　　2.探討腦缺血再灌注大鼠MCA中EDHF舒張反應(yīng)的變化。
　　方法:
　　1.采用離體血管

4、舒縮功能測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)乙酰膽堿(ACh)﹑硫氫化鈉(NaHS)、L-半胱氨酸(L-Cys)等對(duì)大鼠離體MCA的舒張作用,并分別觀察四乙胺(TEA,1×10-3mol/L)對(duì)NaHS舒張大鼠MCA作用的影響及去內(nèi)皮和DL-炔丙基甘氨酸(PPG,1×10-4mol/L)對(duì)L-Cys舒張大鼠MCA作用的影響。血管用一氧化氮(NO)合酶抑制劑(L-NAME,3×10-5mol/L)和前列環(huán)素(PGI2)合酶抑制劑(Indo,1×10-5mo

5、l/L)預(yù)處理后,用ACh誘導(dǎo)血管產(chǎn)生非NO、非PGI2舒張反應(yīng),并分別觀察TEA(1×10-3mol/L)或PPG(1×10-4mol/L)對(duì)這種非NO、非PGI2舒張反應(yīng)的影響。
　　2.運(yùn)用膠原酶Ⅱ等消化大鼠MCAs獲取混合細(xì)胞懸液,磁珠分離法(magnetic cell separation system)分離純化大鼠MCAs內(nèi)皮細(xì)胞,采用RT-PCR的方法檢測(cè)正常大鼠MCAs內(nèi)皮細(xì)胞中內(nèi)源性H2S合酶—CSEmRNA的表

6、達(dá)。
　　3.采用線(xiàn)栓法復(fù)制局灶性腦缺血(MCAO)再灌注損傷模型,觀察大鼠神經(jīng)功能缺陷,檢測(cè)腦梗死體積和腦組織中H2S含量的變化及EDHF介導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)的變化。并用RT-PCR的方法檢測(cè)腦缺血再灌注過(guò)程中CSEmRNA的表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.在KCl(30mmol/L)預(yù)收縮的大鼠MCA環(huán)上,ACh(10-7~10-4.5mol/L)可濃度依賴(lài)性舒張大鼠MCA,血管用L-NAME(3×10-5mol/

7、L)和Indo(10-5mol/L)預(yù)處理后,ACh對(duì)MCA仍具有舒張作用。但鈣激活鉀通道(KCa通道)阻斷劑四乙胺(TEA,1×10-3mol/L)或CSE(內(nèi)源性H2S合酶)抑制劑PPG(1×10-4mol/L)可明顯取消這種MCA的舒張。NaHS(10-5~10-2.5mol/L,H2S供體)也可濃度依賴(lài)性舒張MCA,但可被1×10-3mol/LTEA顯著地抑制;L-Cys(10-5~10-2.5mol/L,CSE底物)也可誘導(dǎo)M

8、CA舒張,但PPG(1×10-4mol/L)或去除血管內(nèi)皮可顯著抑制L-Cys的這種舒張作用。。
　　2.采用磁珠分離法分離純化得到大鼠MCAs內(nèi)皮細(xì)胞,運(yùn)用RT-PCR的方法檢測(cè)結(jié)果顯示大鼠MCAs內(nèi)皮細(xì)胞上有CSEmRNA條帶的表達(dá)。
　　3.在腦缺血再灌注損傷中,大鼠MCA中EDHF介導(dǎo)的舒張反應(yīng)明顯增強(qiáng),大鼠MCA內(nèi)皮細(xì)胞中CSEmRNA表達(dá)上調(diào),大鼠腦組織H2S含量顯著增多。
　　結(jié)論:
　　1.在大鼠