C反應(yīng)蛋白介導(dǎo)腦缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)及其機(jī)制的研究.pdf

1、C反應(yīng)蛋白(CRP)是由炎癥或組織損傷產(chǎn)生的非特異的急性時(shí)相反應(yīng)中最具代表性的標(biāo)志物。研究證實(shí)缺血性腦卒中能夠啟動(dòng)急性時(shí)相反應(yīng)而導(dǎo)致CRP水平升高，事實(shí)上大部分腦卒中病人經(jīng)常合并其他一些病理過(guò)程，特別是急性腦缺血后很快發(fā)生的感染，也可能使CRP水平升高。此外，臨床研究結(jié)果提示血漿CRP水平不僅與腦缺血的發(fā)生相關(guān)，而且與腦卒中預(yù)后的危險(xiǎn)程度、新發(fā)血管性事件等明顯相關(guān)；升高的CRP水平能夠反映腦梗塞的程度，是腦卒中患者存活率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

2、同時(shí)越來(lái)越多的體外數(shù)據(jù)表明，病理水平的CRP能夠作用于單核/巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，分泌一系列的致炎分子。這些分子直接或者間接參與了動(dòng)脈粥樣硬化病變過(guò)程的不同階段。目前并不清楚CRP是否直接參與了腦缺血再灌注損傷過(guò)程，尤其是腦微血管損傷過(guò)程。 本研究采用與人類缺血性腦卒中相類似的大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型，檢測(cè)腦缺血再灌注后血漿CRP水平以及腦中CRP蛋白或mRNA表達(dá)變化，并研究炎性刺激或者缺氧/復(fù)氧條件下腦內(nèi)

3、皮細(xì)胞等血管細(xì)胞是否表達(dá)CRP以及表達(dá)的變化；另一方面，腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的重要組成部分，有著獨(dú)特的生化特性。我們采用體外培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞研究CRP在病理水平時(shí)對(duì)腦微血管可能的作用，尤其是對(duì)細(xì)胞粘附分子表達(dá)的影響，并探討可能的作用機(jī)制以及辛伐他汀、吡格列酮等藥物的作用，為進(jìn)一步研究缺血性腦損傷機(jī)制及防治策略提供理論依據(jù)。 結(jié)果表明，大鼠MCAO2h再灌注24h后，血清CRP水平顯著升高約60％(P＜0.01)，逆轉(zhuǎn)

4、錄多聚酶鏈反應(yīng)結(jié)果顯示缺血2h再灌注6h，皮層CRPmRNA表達(dá)增加，于24h達(dá)到最高(P＜0.01)，未檢測(cè)到海馬CRPmRNA表達(dá)。免疫組化染色結(jié)果與此一致，與假手術(shù)組相比，再灌注48h后，在缺血灶周圍陽(yáng)性細(xì)胞增多。脂多糖(LPS，1mg/L)顯著上調(diào)大鼠腦微血管細(xì)胞(RBE4)、人單核細(xì)胞(THP-1)的CRP蛋白或mRNA表達(dá)，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加(P＜0.05)。RBE4缺氧6h復(fù)氧，6h后CRPmRNA有所升高，12h達(dá)到最

5、高(P＜0.01)。在小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(bEnd.3)，CRP(1-75mg/L)孵育24h能顯著增加乳酸脫氫酶漏出(P＜0.01)，且與CRP濃度呈正相關(guān)；同時(shí)免疫印跡分析顯示，CRP可使信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子-3(STAT3)酪氨酸殘基快速磷酸化，細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)、血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)的表達(dá)顯著升高(P＜0.01)；與較早前的報(bào)道不同，無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)，CRP也能顯著增加ICAM-1的表達(dá)(P＜0.

6、01)；辛伐他汀、吡格列酮和AG490等藥物能顯著抑制CRP誘導(dǎo)的粘附分子表達(dá)作用(P＜0.05)。 總之，腦缺血/再灌注可導(dǎo)致循環(huán)CRP水平升高，而CRP在腦內(nèi)皮細(xì)胞或其他血管細(xì)胞以及缺血后腦組織的表達(dá)可能使損傷局部濃度遠(yuǎn)高于循環(huán)水平；升高的CRP可能通過(guò)誘導(dǎo)粘附分子表達(dá)上調(diào)而直接參與了腦血管內(nèi)炎癥過(guò)程，加重血管功能損傷。進(jìn)一步深入闡明CRP的可能作用及機(jī)制，有可能為缺血性腦卒中及其他腦血管疾病的預(yù)防與治療開辟新的途徑。