蜈蚣有效部位抗心肌缺血作用及其NO機制研究.pdf

1、蜈蚣屬于蟲類中藥材，具有鎮(zhèn)靜熄風、通絡止痛之功效，中醫(yī)學認為“其走竄之力最速，內(nèi)而臟腑外而經(jīng)絡，凡氣血凝聚之處皆能開之”。蜈蚣具有改善微循環(huán)、消除血栓、鎮(zhèn)靜止痛、抗炎、降壓等作用。以蜈蚣為主要藥味的復方在臨床應用非常廣泛，其復方制劑通心絡等已證明對心肌缺血有顯著療效，能夠改善心功能。但單味藥蜈蚣有效部位抗心肌缺血的作用及其相關機制并不十分清楚，本文探討通心絡組成中的單味藥蜈蚣有效部位抗心肌缺血的作用，為臨床使用蜈蚣治療心臟病提供實驗依據(jù)

2、。 一、建立精氨酸加壓素誘導的大鼠冠脈痙攣心肌缺血模型 SPF級Sprague Dawley雄性大鼠，200～250克，32只，中山大學實驗動物中心提供。隨機分為四組：對照組、AVP-1組(0.2 IU/kg)、AVP—2組(0.5 IU/kg)、AVP—3組(1.0 IU/kg)，分籠飼養(yǎng)，實驗前禁食12h。予腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6 ml/kg)，其中AVP-1組頸靜脈注射AVP0.2 IU/kg，AVP—2組

3、頸靜脈注射AVP0.5 IU/kg，AVP—3組頸靜脈注射AVP1.0 IU/kg，對照組頸靜脈注射1 ml/kg生理鹽水，測量各組注射后10min內(nèi)心電圖ST段、S波、T波的變化幅度。2小時后各組大鼠心臟采血處死，取心臟作冰凍切片，觀察病理改變。選取心肌缺血造模成功的AVP劑量。結(jié)果表明，AVP造模的最佳劑量是0.5 IU/kg。 二、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的量效—時效觀察 1)量效觀察：雄性SD大鼠，分成模型組、蜈蚣

4、有效部位各不同劑量組(0.15625、0.3125、0.625、1.25g/kg)，腹腔注射給藥3d。各組在最后1d腹腔注射給藥30min后頸靜脈注射精氨酸加壓素(0.5 IU/kg)，記錄心電圖觀察ST段、S波、T波的幅度變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位的最佳劑量為0.625g/kg。 2)時效觀察：雄性SD大鼠，分成模型組、蜈蚣有效部位各不同給藥時間組(1d、3d、5d)，給予劑量0.625g/kg。各組在最后1d腹腔注射給藥3

5、0min后頸靜脈注射精氨酸加壓素(0.5 IU/kg)，記錄心電圖觀察ST段、S波、T波的幅度變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位的最佳給藥時間是3d。 3)由以上結(jié)果得出：蜈蚣有效部位0.625g/kg腹腔注射3天可以得到最佳的抗AVP誘導的心肌缺血的作用。 三、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的效應研究 雄性SD大鼠，分為對照組、模型組、蜈蚣有效部位組、一氧化氮合酶阻斷劑組(以下稱L—NAME組)。按上述蜈蚣有效部位的劑量和時

6、間給予用藥(0.625g/kg，3d)。最后1d腹腔注射給藥30min后，腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6ml/kg)，予頸靜脈注射AVP，其中L—NAME組在注射AVP前20分鐘注射L—NAME(10mg/kg)。觀察各組血流動力學心功能指標。2小時后心臟采血，心臟組織用4℃生理鹽水沈干凈，吸水紙吸干置于—80℃冰箱備勻漿用。檢測血漿NO含量、心肌組織SOD活性、MDA含量及血清心肌酶CK、LDH變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位能提高LVSP

7、，降低MAP，有效改善心臟收縮和舒張功能，升高血漿中NO的含量，增加心肌組織中SOD活力，降低心肌組織中MDA含量，使心肌酶CK、LDH活性降低。而L—NAME組能夠抑制蜈蚣有效部位的抗心肌缺血的作用，與模型組效果接近。 四、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的NO—NOS—NOSmRNA機制探討 將第三部分各組大鼠心肌組織進行免疫組織化學實驗觀察eNOS蛋白的表達，進行RT—PCR實驗觀察心肌組織eNOSmRNA轉(zhuǎn)錄情況。

8、 1)心肌組織eNOS蛋白的表達：結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組心肌中eNOS的陽性細胞面積有所下降，蜈蚣有效部位可明顯升高心肌中eNOS的陽性細胞。提示蜈蚣有效部位可以升高心肌組織中的eNOS蛋白表達。 2)心肌組織eNOSmRNA轉(zhuǎn)錄：結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組的心肌細胞中eNOS的mRNA轉(zhuǎn)錄明顯下降，蜈蚣有效部位可升高心肌細胞中eNOSmRNA的轉(zhuǎn)錄。提示蜈蚣有效部位可以增強eNOS的mRNA轉(zhuǎn)錄。 結(jié)論：

9、 1)通過觀察大鼠頸靜脈注射不同劑量AVP后心電圖的變化，以及心肌組織HE染色病理改變，探討建立AVP誘導大鼠冠脈痙攣心肌缺血的模型。AVP造模最佳劑量是0.5 IU/kg。 2)探討蜈蚣有效部位抗AVP誘導的心肌缺血的最佳劑量和作用時間。最佳劑量是0.625g/kg，最佳作用時間是3d。 3)蜈蚣有效部位能明顯對抗AVP所致的心肌缺血損傷，能夠提高LVSP、+dp/dtmax，降低MAP、LVEDP、—dp/dt

10、max，改善心臟收縮和舒張功能，升高血漿NO含量，提高心肌組織SOD活性，降低心肌組織MDA含量，降低血清CK、LDH活性。病理形態(tài)學表明蜈蚣有效部位能夠改善心肌缺血導致的心肌細胞腫脹，減少炎癥細胞浸潤。上述結(jié)果表明，蜈蚣有效部位對AVP所致的大鼠心肌缺血具有顯著的防治作用。 4)蜈蚣有效部位可以通過升高eNOSmRNA的表達水平，升高eNOS蛋白表達而增加NO的生成，實現(xiàn)抗心肌缺血的作用。 5)阻斷實驗表明一氧化氮合酶