回心草活性單體RR7的抗心肌缺血作用及機(jī)制研究.pdf

1、滇產(chǎn)回心草(真蘚科植物大葉蘚RhodobryumroseumLimp．)為云南省多民族共用的傳統(tǒng)草藥，以彝族、景頗族、納西族等為主，常單用或同大棗、胡椒、豬心等配伍用水煎煮成湯劑服用治療心臟病(心痛、心慌、心悸、氣短)等。鑒于回心草確切的臨床療效，結(jié)合本課題組前期對(duì)回心草初步的藥理作用及試驗(yàn)結(jié)果分析推測(cè)，回心草乙酸乙酯活性部位提取物及其從中分離出的RR7(胡椒堿)在心臟疾病中發(fā)揮著重要的作用，并推測(cè)其有明顯的抗氧化作用與抗心肌缺血作用，

2、尤其實(shí)驗(yàn)應(yīng)用回心草制劑(多為水提物)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)有任何明顯毒副作用。為進(jìn)一步闡明回心草活性物質(zhì)及其分離出的RR7的作用機(jī)制，本文采用藥理和分子相結(jié)合的方法，對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 在經(jīng)典的動(dòng)物常壓耐缺氧模型、斷頭實(shí)驗(yàn)以及特異性缺氧模型中，RR7明顯提高動(dòng)物耐缺氧能力，延長(zhǎng)其存活時(shí)間，具有明顯的抗心肌缺血與抗腦缺氧的保護(hù)作用，并有劑量依賴性；針對(duì)RR7的抗缺氧作用我們采用垂體后葉素誘導(dǎo)建立特異性心肌缺血模型，在垂體后葉

3、素誘導(dǎo)的心肌缺血模型上，RR7的低、中、高劑量對(duì)心肌與血清的抗氧化酶水平有明顯影響，可升高SOD、降低MDA，提示是其抗心肌缺血的機(jī)理之一。 在急性心肌缺血性疾病中，治療的直接目的是防治心肌細(xì)胞壞死，以往的評(píng)價(jià)方法不能觀察心肌細(xì)胞的存活情況，主要是過(guò)氧化氫的濃度過(guò)低不能直接導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡，濃度太高則會(huì)將細(xì)胞全部殺死，無(wú)法觀察藥物作用。本研究成功建立了MTT的方法檢測(cè)原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞損傷模型，并采用此模型評(píng)價(jià)了RR7的細(xì)胞保

4、護(hù)作用，結(jié)果表明，低劑量的陽(yáng)性藥心得安，中、高劑量的RR7均可以有效的保護(hù)過(guò)氧化氫損傷的心肌細(xì)胞，并呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系；提示RR7可能是通過(guò)抗氧化作用機(jī)制來(lái)完成的。 進(jìn)一步采用過(guò)氧化氫損傷心肌細(xì)胞線粒體的模型，觀察RR7對(duì)其保護(hù)作用的影響。RR7可升高超氧化物歧化酶SOD、GSH、AST；減少線粒體MDA的生成和依賴ATP的Na+-K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性。因而RR7緩解心肌線粒體的氧化損傷，是其抗心肌缺血及心肌保護(hù)作

5、用機(jī)制之一。 在異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌缺血模型的心電圖與病理心肌組織上，RR7表現(xiàn)出明顯的抗心律失常作用；可以明顯改善受損的心肌組織，電鏡檢測(cè)表明，RR7組動(dòng)物心肌的不完整心肌纖維、空泡化明顯減少；心肌細(xì)胞玻璃樣壞死同樣明顯減少。 β受體是參與心臟功能活動(dòng)最重要的受體，為了進(jìn)一步闡明RR7對(duì)心肌β受體的作用及其抗心肌缺血的保護(hù)作用與β受體的關(guān)系，本文觀察了RR7對(duì)β受體蛋白表達(dá)的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，異丙腎上腺素?fù)p傷組可

6、以明顯增強(qiáng)β受體蛋白的表達(dá)(P＜0.01)，RR7組抑制了β受體蛋白表達(dá)的增強(qiáng)(P＜0.01)。我們還發(fā)現(xiàn)，小劑量RR7作用于心肌時(shí)，明顯抑制β受體蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，但大劑量RR7抑制β受體蛋白表達(dá)增強(qiáng)的作用減弱；同時(shí)，在心電圖實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，RR7隨著劑量的增加，心率增加、T波振幅增大，β1受體基因表達(dá)也隨之增加。由此我們推測(cè)，當(dāng)RR7小劑量時(shí)，可以起到β受體阻斷的作用，從而起到抗心肌缺血、保護(hù)心肌的作用，但是隨著劑量增加后，作用則會(huì)相