三氧化二砷對(duì)LA-N-5細(xì)胞MYCNmRNA表達(dá)及細(xì)胞侵襲性的影響.pdf

1、背景：神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuroblastoma，NB)是兒童時(shí)期最常見的顱腦外實(shí)體腫瘤，其進(jìn)展速度、耐藥性及預(yù)后等特點(diǎn)與MYCN基因mRNA的超量表達(dá)密切相關(guān)。由于其轉(zhuǎn)移早，惡性程度高，盡管采取積極的治療，目前5年生存率仍然極低，因此迫切需要尋找新的治療方法以改善NB的預(yù)后。三氧化二砷(As2O3)由我國(guó)學(xué)者首先用于急性早幼粒細(xì)胞性白血病(APL)的治療并取得了較好療效，但其作用機(jī)制不清，可能與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等有關(guān)。A

2、s2O3分子作用機(jī)制及對(duì)NB細(xì)胞侵襲性的影響尚缺乏研究。
　　 目的：研究As2O3對(duì)LA-N-5細(xì)胞MYCN mRNA表達(dá)及其細(xì)胞侵襲力的變化，以探討As203對(duì)NB的作用機(jī)制。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分兩部分，一、采用RT-PCR檢測(cè)As2O3作用前后LA-N-5細(xì)胞MYCN mRNA的變化；二、用Transwell小室檢測(cè)As2O3作用后LA-N-5細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　 將LA-N-5細(xì)胞與不同濃度的As2

3、O3共同培養(yǎng)24h、48h和72h，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后行PCR，產(chǎn)物用瓊脂糖電泳，紫外凝膠掃描儀觀察電泳結(jié)果，并用凝膠成像儀附帶的圖像分析軟件，測(cè)定電泳條帶的光密度值，求出各濃度及時(shí)間點(diǎn)的平均值，以MYCN/GAPDH光密度比值表示單細(xì)胞MYCN mRNA表達(dá)水平相對(duì)值并做量化統(tǒng)計(jì)分析；用鋪有Matrigel的Transwell小室模擬哺乳動(dòng)物的基底膜，光學(xué)顯微鏡觀察LA-N-5在As2O3作用后穿過膜的細(xì)胞數(shù)量，了解細(xì)胞侵襲能力改變

4、。
　　 結(jié)果：1.0.75μmol/L、1.5μmol/L、3.0μmol/L的As2O3作用48小時(shí)均可使LA-N-5細(xì)胞MYCN mRNA的表達(dá)減少，以3.0μmol/L組最明顯，MYCN/GAPDH光密度比值分別為0.89±0.03，0.98±0.05，0.52±0.03，對(duì)照組為1.21±0.02，與對(duì)照組相比，P均<0.01；2.相同濃度下(3.0μmol/L)，As2O3作用48h后MYCN mRNA的表達(dá)明顯降低

5、，延長(zhǎng)時(shí)間后抑制作用仍能保持，24h、48h、72h MYCN/GAPDH光密度比值分別為1.18±0.04、0.64±0.03、0.86±0.01，對(duì)照組為1.15±0.02，與對(duì)照組相比，P值分別為0.081、0.000、0.000；3.以上述三個(gè)濃度的As2O3作用24h后，LA-N-5細(xì)胞穿過matrigel侵襲膜的細(xì)胞數(shù)均較對(duì)照組減少，分別為28.00±4.00、19.33±4.16、6.33±1.53，對(duì)照組為46.33±6