輻射抗拒性食管癌細(xì)胞系TE-1R的建立及輻射抗性的初步研究.pdf

1、目的：建立具有輻射抗拒性食管癌細(xì)胞系TE-1R，初步探討輻射抗性的食管癌細(xì)胞系TE-1R的輻射抗性與RPA1的關(guān)系。研究輻射抗性食管癌細(xì)胞系TE-1R的增殖抑制率、凋亡率，初步探討TE-1R輻射抗性的機(jī)理。觀察RPA1 mRNA和蛋白在人食管癌細(xì)胞TE-1和TE-1R中的表達(dá)情況，為以RPA1為靶點(diǎn)的分子靶向放療增敏提供體外實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　方法：分次、間歇照射的方法(2Gy5次)誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞系TE-1產(chǎn)生具有穩(wěn)定輻射抗拒性

2、的細(xì)胞亞系TE-1R，在倒置顯微鏡下觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異。分別以TE-1R、TE-1為實(shí)驗(yàn)組和對照組，給予6MVX射線單次照射2 Gy，用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞的增殖抑制;采用流式細(xì)胞儀(FACS)檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞凋亡率;采用westernblot檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組的細(xì)胞RPA1蛋白表達(dá)水平;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞中RPA1 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：利用X線

3、間歇、多次照射食管癌細(xì)胞TE-1，篩選出在形態(tài)學(xué)及放射生物學(xué)參數(shù)都穩(wěn)定的放射抗拒性食管癌細(xì)胞系TE-1R;2 Gy射線照射后，TE-1R細(xì)胞的增殖抑制率低于TE-1細(xì)胞，TE-1R的倍增時(shí)間長于TE-1的倍增時(shí)間，2Gy照射后12h、24h和48 h TE-1R細(xì)胞的凋亡率低于TE-1的凋亡率，其差異具有顯著性(P＜0.05)。RPA1 mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細(xì)胞中均有表達(dá)，Western blot結(jié)果顯示:對照組RPA1蛋白

4、表達(dá)較高(0.42±0.011)％，實(shí)驗(yàn)組RPA1蛋白表達(dá)較對照組高（0.89±0.017）％，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P＜0.05)％。RT-PCR結(jié)果顯示:對照組RPA1mRNA表達(dá)較弱(0.65±0.012)％，實(shí)驗(yàn)組RPA1 mRNA表達(dá)較對照組較高（0.89±0.018）％，其差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1.成功的建立了輻射抗性的食管癌細(xì)胞系TE-1R;2.食管癌TE-1R細(xì)胞的增殖抑制率比TE-1細(xì)胞低，放