杜仲對MC3T3-E1成骨細胞及OPG-RANKL比值的影響.pdf

1、杜仲是我國名貴滋補藥材，具有補肝腎、強筋骨、安胎、降血壓、久服輕身耐勞之功效，近些年來國內(nèi)外學者對杜仲進行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)杜仲對骨質(zhì)疏松癥具有積極的防治效果，但杜仲對于骨質(zhì)疏松癥的研究多停留于對成骨細胞增殖和分化效果的觀察和體內(nèi)效果觀察，而杜仲對于骨質(zhì)疏松癥的防治機制的研究卻少有涉及。本實驗著眼于杜仲對骨質(zhì)疏松癥防治機制的研究，應(yīng)用杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細胞，觀察杜仲對MC3T3-E1成骨細胞的增殖和分化成熟作用和杜仲

2、對OPG/RANKL比值的作用，為杜仲基于OPG/RANKL/RANK信號通路治療骨質(zhì)疏松癥提供理論基礎(chǔ)。
　　 本實驗分為二個部分，第一部分為杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞增殖和分化的研究，第二部分為杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的OPG/RANKL比值的影響的研究。
　　 在第一部分杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的分化和增殖的研究中，首先用MTT法確定杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨

3、細胞的適宜濃度區(qū)間，并確定應(yīng)用于實驗的終濃度。其次用高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細胞，再次用MTT法確定杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的增殖作用。然后用高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細胞，檢測ALP觀察杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的分化作用。最后用茜素紅染色法鏡下觀察高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的鈣化作用。
　　 第二

4、部分中首先用RT-PCR法觀察，高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的OPG和RANKL的轉(zhuǎn)入情況，進一步用ELISA法觀察杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的OPG和RANKL的表達情況，并確定杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞OPG/RANKL比值的影響。
　　 本實驗發(fā)現(xiàn)，杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成骨細胞的適宜濃度區(qū)間為10-1～10-3mg/mL，而杜仲乙醇提取液對MC3T3-

5、E1成骨細胞的增殖和分化研究發(fā)現(xiàn)，高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液均可促進MC3T3-E1成骨細胞增殖和分化成熟，且均表現(xiàn)出濃度依賴性。第二部分對OPG/RANKL比值的研究發(fā)現(xiàn)，杜仲乙醇提取液不僅可以從轉(zhuǎn)入過程對MC3T3-E1成骨細胞促進OPG、抑制RANKL的作用，而且可以對于OPG和RANKL的表達也有促進和抑制作用，并且對于OPG/RANKL的比值有上調(diào)作用。
　　 通過本實驗可知，杜仲乙醇提取液對MC3T3-E1成