下調(diào)LMNA基因?qū)Π唏R魚早期造血發(fā)育影響的研究.pdf

1、目的：本課題通過設(shè)計(jì)針對 LMNA基因的LMNA-Morpholino，顯微注射入斑馬魚胚胎，下調(diào)LMNA基因的表達(dá)，利用原位雜交及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測與造血發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的變化，以期了解下調(diào)LMNA基因?qū)Π唏R魚早期造血發(fā)育的影響。
　　方法：利用顯微注射的方法將 Morpholino注入斑馬魚胚胎，用 Western Blot的方法檢測野生型的斑馬魚與注入LMNA-Morpholino的斑馬魚體內(nèi)LMNA蛋白的表

2、達(dá)差異。若 LMNA-Morpholino注入后 LMNA蛋白的表達(dá)量降低，說明LMNA-Morpholino可以有效的下調(diào) LMNA蛋白的表達(dá)。收集野生型的相應(yīng)時(shí)相斑馬魚胚胎作為對照組，收集顯微注射LMNA-Morpholino的相應(yīng)時(shí)相斑馬魚胚胎作為實(shí)驗(yàn)組，利用原位雜交及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法從基因水平檢測LMNA基因下調(diào)后斑馬魚中不同造血發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的變化。
　　結(jié)果：Western Blot結(jié)果顯示野生型斑馬魚

3、體內(nèi)LMNA蛋白有兩個(gè)條帶，大小分別為69KD和62KD。顯微注射入LMNA-Morpholino的斑馬魚體內(nèi)LMNA蛋白也表達(dá)相同大小的兩個(gè)條帶，但是表達(dá)水平明顯降低。說明LMNA-Morpholino可以有效的下調(diào)LMNA蛋白的表達(dá)。原位雜交和實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果顯示，顯微注射 LMNA-Morpholino的相應(yīng)時(shí)相的實(shí)驗(yàn)組斑馬魚胚胎較之對照組的野生型斑馬魚胚胎相應(yīng)造血轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達(dá)有所下降。
　　結(jié)論：1，野生型斑