艾塞那肽通過抑制聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1延緩糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展.pdf

1、背景:
　　糖尿病是由多種原因引起的臨床常見疾病，其發(fā)病率正隨著人民生活水平的提高、人口老化、生活方式改變而迅速增加。據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟估計(jì)，2011年全球有2.82億糖尿病男性和3.17億糖尿病女性死亡，其中多數(shù)死于心血管疾病。因此，對(duì)于糖尿病心血管并發(fā)癥的研究顯得尤為重要?，F(xiàn)今的糖尿病治療藥物可分為三類，分別為促胰島素分泌劑/胰島素、胰島素增敏劑、葡萄糖吸收抑制劑，而近年來新推出的胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like

2、peptide，GLP-1)受體激動(dòng)劑及DPP-4(dipeptidyl peptidase-4)抑制劑受到臨床的廣泛關(guān)注。GLP-1是由腸道L細(xì)胞分泌的重要調(diào)節(jié)激素，可以通過多種機(jī)制降低過高的血糖水平，從而對(duì)全身各器官組織發(fā)揮保護(hù)作用。聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]是PARP超家族的一員，是一類極為重要的核蛋白，PARP-1的激活在動(dòng)脈粥樣斑塊的形成中發(fā)揮極其重要的作

3、用。而誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase，iNOS)是一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的一種，當(dāng)細(xì)胞受到病理刺激后開始表達(dá)，從而催化產(chǎn)生過多的一氧化氮(NO)，介導(dǎo)多個(gè)病理學(xué)過程。已有文獻(xiàn)證實(shí)，GLP-1可以通過PARP-1/iNOS途徑保護(hù)胰島微循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞。因此我們推斷，GLP-1可能通過PARP-1途徑延緩糖尿病的動(dòng)脈粥樣硬化(atheroscleros

4、is，AS)的進(jìn)程。
　　目的:
　　1、研究艾塞那肽對(duì)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響。
　　2、研究艾塞那肽對(duì)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.糖尿病模型建立及分組 ApoE基因敲除小鼠自10周齡左右（體重＞25g）開始造模，腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ，70mg·kg-1．d-1)，連續(xù)注射5天，誘導(dǎo)糖尿病模型形成。末次STZ注射72h后測(cè)定全血隨機(jī)血糖，

5、隨機(jī)血糖＞15mmol/L者確定為糖尿病。成功造模的小鼠再隨機(jī)分為糖尿病組和艾塞那肽組，每日分別給予醋酸鈉和艾塞那肽醋酸鈉溶液(100ug·kg-1·d-1)腹腔注射，療程6周。未造模小鼠為對(duì)照組。三組均給予高脂飲食。
　　2.標(biāo)本收集造模后的小鼠給予相應(yīng)處理6周后，實(shí)施安樂死。留血清備用。一部分小鼠留取主動(dòng)脈，儲(chǔ)存于-80℃以備行分子生物學(xué)檢測(cè);另一部分小鼠留取全部主動(dòng)脈及心臟儲(chǔ)存于4％多聚甲醛溶液中，以備行相應(yīng)染色。固定好的心

6、臟取心底1/3位置使用冰凍包埋劑包埋，然后制作5μm的主動(dòng)脈根部冰凍切片。使用電子天平稱量每只小鼠的體重和心重，稱量3次，取平均值。
　　3.血清指標(biāo)檢測(cè)利用酶法檢測(cè)血脂水平（包括總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇），己糖激酶法檢測(cè)血糖水平。
　　4.主動(dòng)脈病理學(xué)檢查HE染色用于觀察主動(dòng)脈根部斑塊面積?？辔端?天狼猩紅染色評(píng)估斑塊內(nèi)膠原面積。油紅O染色評(píng)估斑塊內(nèi)脂質(zhì)面積，大體油紅O染色評(píng)估主動(dòng)脈全長(zhǎng)的

7、斑塊面積。免疫組化法測(cè)定MOMA-2及α-SMA在斑塊內(nèi)的表達(dá)。評(píng)估斑塊的穩(wěn)定系數(shù)，公式為（膠原面積+平滑肌細(xì)胞面積）/（油紅O面積+巨噬細(xì)胞面積）。
　　6 Western Blot法檢測(cè)主動(dòng)脈中PARP-1、iNOS蛋白的表達(dá)。
　　7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用spss17.0軟件處理，采用單因素方差分析，并進(jìn)行LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)運(yùn)用Dunnett's T3檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

8、r>　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組相比，糖尿病組小鼠的血清總膽固醇、甘油三酯和血糖水平明顯升高，主動(dòng)脈根部斑塊面積占血管管腔面積的百分比明顯增高，斑塊穩(wěn)定性明顯降低，聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)增高。與糖尿病組相比，艾塞那肽組小鼠的血清總膽固醇明顯降低，甘油三酯降低，主動(dòng)脈根部斑塊面積百分比明顯降低，斑塊穩(wěn)定性明顯增高，聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)降低。
　　結(jié)論:
　　1、使用STZ