不同粗糙度冠修復(fù)合金對種植體齦下優(yōu)勢菌黏附性的影響.pdf

1、種植義齒成功與否，除了與手術(shù)技術(shù)、修復(fù)技術(shù)、生物力學(xué)、患者的骨質(zhì)量以及口腔衛(wèi)生有關(guān)外，種植體周圍組織的炎癥也是導(dǎo)致種植體失敗的主要原因之一。種植體周圍炎一般認為是口腔微生物直接引起的種植體周軟、硬組織的炎癥過程。微生物在修復(fù)體表面的黏附與定植是其產(chǎn)生致病性的首要條件之一，而不同材料不同粗糙度對細菌的黏附定植均有不同的影響。本實驗選擇兩種粗糙度的四種臨床常用合金制成試件，然后將其分別粘固在種植鈦板上，觀察四種齦下優(yōu)勢菌在其上黏附與定植的分

2、布情況。 目的：通過對不同粗糙度的臨床常用冠修復(fù)合金與種植鈦上牙齦卟啉單胞菌(Pg)，伴放線放線桿菌(Aa)，中間普氏菌(Pi)，具核梭桿菌(Fn)黏附量的檢測，分析不同粗糙度冠修復(fù)合金對種植體齦下優(yōu)勢菌黏附性的影響。為臨床冠修復(fù)合金的選擇提供試驗依據(jù)。 方法：1試件的制作制作種植體的純鈦8.0mm×5.0mm×3.0mm試件，萬能磨床磨光表面，表面粗糙度Ra=1.60μm，共128個。四種合金(含鈦鎳鉻合金、鎳鉻合金、

3、金鉑合金、金鈀合金)制成5.0mm×4.0mm×0.3mm試件各32個，共128個。2試件的分組：根據(jù)拋光方法進行分組，在相同條件，相等時間，試件采用兩種拋光方法，第一種拋光方法是噴砂、粗砂輪、細砂輪、砂布卷、硬橡皮輪、拋光膏及絨輪依次拋光，分組為：A1組(含鈦鎳鉻合金)、B1組(鎳鉻合金)、C1組(金鉑合金)、D1組(金鈀合金)，每組16個試件，共64個；第二種拋光方法是噴砂、粗砂輪、細砂輪、砂布卷、硬橡皮輪依次拋光，分組為：A2組(

4、含鈦鎳鉻合金)、B2組(鎳鉻合金)、C2組(金鉑合金)、D2組(金鈀合金)，每組16個試件，共64個。3試件表面粗糙度的測量在被測試件試驗面隨機選取測試點，測試長度為0.8mm。形貌儀傳感觸針以1mm/s速度從試驗面上走過，測定表面粗糙度(Ra)。4試件的粘固試件拋光后用酒精棉球擦拭掉表面雜質(zhì)，軟皂液中浸泡，蒸餾水超聲清洗，高溫高壓蒸汽消毒。在垂直凈化工作臺中用聚羧酸鋅水門汀將金屬試件粘固于種植純鈦板的一端，放在無菌玻璃瓶中備用。5菌液

5、的制備1)細菌的復(fù)蘇，純化將四種細菌(第1組牙齦卟啉菌、第2組中間普氏菌、第3組伴放線放線桿菌、第4組具核梭桿菌)接種于預(yù)還原后的BHI(牛腦心)液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)120h后，轉(zhuǎn)種于預(yù)還原后的BHI(牛腦心)固體培養(yǎng)基中分純，37℃厭氧培養(yǎng)120h，挑取單個菌落進行鑒定。2)細菌懸液的制備：將純化后的各菌接種于BHI血瓊脂培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)120h后，用BHI液體培養(yǎng)基洗脫各菌，配制成9×108CFU/ml菌液。6各組細

6、菌對試件的粘附測定將處理好的合金試件組分別置于無菌的24孔板中，每孔一枚試件，每孔中再加入等量的BHI液體培養(yǎng)基和實驗用的菌懸液，厭氧培養(yǎng)168h。7菌落計數(shù)取出培養(yǎng)后的各試件，放入無菌PBS液中，振蕩洗滌試件1min，做倍比稀釋。原液，10-1，10-2，10-3，10-4共5個濃度，分別取各濃度菌液20ul，均勻涂布于預(yù)還原后的BHI固體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)120h后進行菌落計數(shù)。8試件的掃描電鏡觀察每種細菌的每組試件取出一件，

7、PBS沖洗3遍，30g/L戊二醛固定，乙醇梯度脫水，臨界點干燥，噴金，掃描電鏡觀察各種菌在試件上的附著情況。 結(jié)果：1合金粗糙度為A1組(含鈦鎳鉻合金)Ra=0.461，B1組(鎳鉻合金)Ra=0.451，C1組(金鉑合金)Ra=0.457，D1組(金鈀合金)Ra=0.454，各組試件粗糙度無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；A2組(含鈦鎳鉻合金)Ra=0.941，B2組(鎳鉻合金)Ra=0.910，C2組(金鉑合金)Ra=0.885

8、，D2組(金鈀合金)Ra=0.901，各組試件粗糙度無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。1組和2組試件粗糙度之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。2第一種拋光方法四種細菌在各試件上的附著量及統(tǒng)計學(xué)分析(1)Aa在A1、B1、C1、D1四組試件上的附著量分別為：5.16±1.121×105CFU/ml，2.95±0.8815×105CFU/ml，9.14±0.850×105CFU/ml，1.68±0.176×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C1組與

9、A1組、B1組、D1組間以及A1組與D1組間有顯著性差異(P＜0.01)，A1組與B1組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，B1組與D1組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；(2)Pg在A1、B1、C1、D1四組試件上的附著量分別為：0.78±0.066×105CFU/ml，0.69±0.156×105CFU/ml，2.87±0.180×105CFU/ml，0.83±0.083×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C1組與其他各組間均有顯著性差異(P

10、＜0.01)，A1組，B1組與D1組間均無統(tǒng)計學(xué)差異，(P＞0.05)；(3)Pi在A1、B1、C1、D1四組試件上的附著量分別為：0.31±0.142×105CFU/ml，0.39±0.240×105CFU/ml，0.77±0.066×105CFU/ml，0.17±0.042×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C1組與A1組、D1組間有顯著性差異(P＜0.01)，C1組與B1組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，A1組、B1組、D1組之間均

11、無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；(4)Fn在A1、B1、C1、D1四組試件上的附著量分別為：1.11±0.204×105CFU/ml，0.87±0.131×105CFU/ml，3.03±0.811×105CFU/ml，0.83±0.131×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C1組與其余各組之間有顯著性差異(P＜0.01)，A1組，B1組，D1組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。3第二種拋光方法四種細菌在各試件上的附著量及統(tǒng)計學(xué)分析(1)Aa

12、在A2、B2、C2、D2四組試件上的附著量分別為：45.67±0.168×105CFU/ml，24.70±0.173×105CFU/ml，70.60±0.092×105CFU/ml，35.67±0.215×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：A2、B2、C2、D2各組之間均有顯著性差異(P＜0.01)；(2)Pg在A2、B2、C2、D2四組試件上的附著量分別為：8.19±0.056×105CFU/ml,6.59±0.060×105CFU/m

13、l，21.87±0.147×105CFU/ml，8.77±0.023×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C2組與其他各組間均有顯著性差異(P＜0.01)，A2組與B2組之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，其余各組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；(3)Pi在A2、B2、C2、D2四組試件上的附著量分別為：4.95±0.009×105CFU/ml，6.90±0.017×105CFU/ml，10.42±0.167×105CFU/ml，3.92±

14、0.120×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C2組與其他各組間均有差異(P＜0.01)，A2組與B2組間有顯著性差異(P＜0.01)，其余各組之間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；(4)Fn在A2、B2、C2、D2四組試件上的附著量分別為：19.57±0.390×105CFU/ml，14.60±0.111×105CFU/ml，38.40±0.356×105CFU/ml，14.33±0.283×105CFU/ml，統(tǒng)計學(xué)分析：C2組與其余各

15、組之間有顯著性差異(P＜0.01)，A2組，B2組，D2組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。4同一種細菌在不同粗糙度的同一種金屬上附著量的統(tǒng)計學(xué)分析B1組和B2組、C1組和C2組、D1組和D2組合金中，四種細菌在兩種粗糙度同一種合金上的附著量均有顯著性差異(P＜0.01)，A1組和A2組合金中，細菌Aa、Pg的附著量有顯著性差異(P＜0.01)，細菌Pi、Fn的附著量有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。5掃描電鏡觀察結(jié)果總的分布情況是：第二種

16、拋光方法中各合金試件上附著的細菌量明顯多于第一種拋光方法的附著量，但兩種方法中相對應(yīng)的鈦板上細菌的附著量沒有明顯差異。在每組中具體分布情況是：Aa在各組試件上的附著情況：金鉑合金試件上可見大量的菌落，在金鉑合金試件表面細菌的附著量多于種植鈦板，含鈦鎳鉻合金與鎳鉻合金試件可見一定量菌落附著，前者稍多于后者，但含鈦鎳鉻合金、鎳鉻合金與種植鈦板上細菌的附著量無明顯區(qū)別。金鈀合金試件上細菌附著明顯少于其他各組，鈦板上細菌的附著量也少于鎳鉻合金的

17、鈦板上。Pg在各組試件上的附著情況：金鉑合金試件上有菌落聚集，生長成簇，附著的細菌數(shù)多于鈦板，其余各組合金，包括鈦板上只見有散在細菌黏附。三種合金與鈦板上細菌附著的數(shù)量無明顯差別。Pi在各組試件上的附著情況：金鉑合金試件可見有散在細菌，數(shù)量較其所在的鈦板上稍多，其余各組合金及鈦板上可見散在細菌黏附，合金與鈦板上附著的細菌數(shù)量無明顯區(qū)別。Fn在各組試件上的附著情況：與Pg極為相似，只有金鉑合金上細菌附著的數(shù)量較多，偶有成簇，金鈀合金表面細