骨髓增殖性疾病及肥大細胞病受體酪氨酸激酶基因突變檢測與分析.pdf

1、論文Ⅰ 骨髓增殖性疾病發(fā)病機制探討-受體酪氨酸激酶家族Ⅲ及PTPN11基因突變檢測及分析 目的:首次在42例MPD患者中對這些基因的突變熱點進行廣泛篩查,包括KIT外顯子11及外顯子17,與此同源的FMS、PDGFRA及PDGFRB外顯子12及外顯子18,FMS基因同時檢測外顯子7、9、21及22;FLT3基因FLT3/ITD及D835突變;PTPN11基因外顯子3及外顯子13.結(jié)論:DHPLC技術(shù)結(jié)合直接測序是篩查基因突變的高效及可靠

2、的方法;TA克隆及測序是檢測ITD這一類突變的有效手段.在MPD中,受體酪氨酸激酶家族Ⅲ基因的變異形式有多種,包括SNP、同義突變、錯義突變及內(nèi)部串聯(lián)復(fù)制.發(fā)生在FMS基因及PDGFRB基因的同義突變可能通過影響mRNA的剪接而影響激酶的結(jié)構(gòu)與功能.我們首次在2例MPD患者中發(fā)現(xiàn)FLT3/ITD突變,FLT3/ITD可導(dǎo)致激酶持續(xù)性激活,與MPD發(fā)病密切相關(guān).RAS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中信號分子編碼基因的突變在MPD發(fā)病中有重要意義,基因突變及

3、信號分子的激活主要發(fā)生在受體酪氨酸激酶水平及RAS水平.這些研究結(jié)果對指導(dǎo)MPD的分子靶向治療有重要意義.論文Ⅱ 系統(tǒng)性肥大細胞病KIT基因突變檢測及突變型KIT K509I表達載體的構(gòu)建 目的:對12例SMCD患者進行了KIT外顯子17D816V突變檢測,并對其中D816V陰性的4例SMCD患者及2例FM患者進行了KIT全長外顯子突變檢測,以探討KIT基因突變在該病發(fā)病中的作用.結(jié)論:在我們這一組12例患者中KIT D816陽性率為8

4、.3﹪,低于文獻報道.1例患者發(fā)現(xiàn)有內(nèi)含子1剪接區(qū)的突變,該突變有可能引起mRNA剪接位點的改變進而影響蛋白質(zhì)的翻譯.2例家族性肥大細胞病患者在外顯子9出現(xiàn)的K509I(AAA→ATA)突變是一個新發(fā)現(xiàn)的KIT基因突變,也是在FM患者首次發(fā)現(xiàn)的基因突變.我們認為K509I突變是家族性肥大細胞病發(fā)病的重要原因,對激酶的激活很可能是通過引發(fā)配體非依賴性的受體持續(xù)性二聚化實現(xiàn)的.定點誘變是構(gòu)建突變型表達載體的有效方法,mscvkit509mu