抑制COX-2與5-LOX途徑對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的:探討環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2、COX-2)抑制劑塞來昔布和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)抑制劑 MK-886對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響。
　　 方法:成年雄性健康SD大鼠50只,隨機(jī)數(shù)字表法分為5組:正常組(B1)、缺血再灌注組(B2)、COX-2抑制劑治療組(B3)、5-LOX抑制劑治療組(B4)、聯(lián)合治療組(B5),每組10只。制作大鼠肝臟缺血再灌注模型,夾閉肝臟血管

2、30分鐘致缺血,再灌注后不同時點(術(shù)后30分鐘,術(shù)后60分鐘)處死大鼠,抽取下腔靜脈血并留取肝臟組織(肝左葉)保存待檢測。一步法逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測各組肝組織中COX-2 mRNA及5-LOX mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測肝細(xì)胞凋亡率,；肝組織切片HE染色光鏡下觀察肝細(xì)胞變性、壞死等改變的情況,確定組織損傷程度并統(tǒng)計:血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移

3、(aspartate aminotransferase,AST)檢測肝功能變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.RT-PCR:再灌注后各時點B2組中COX-2 mRNA及5-LOX mRNA的表達(dá)水平均明顯高于B1組(P<0.05)；再灌注后30min,B2,B3,B4及B5組間數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);再灌注后1h,塞來昔布干預(yù)組(B3)COX-2 mRNA的表達(dá)水平較B2下調(diào),而5-LOX mRNA的表達(dá)量較B2組

4、明顯升高(P<0.05)；B4組給予MK-886后5-LOX的mRNA表達(dá)與B2組比較明顯下調(diào)(P<0.05),而COX-2的mRNA表達(dá)與B2比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；兩種藥物聯(lián)合作用后COX-2和5-LOX的mRNA表達(dá)較B2組均下調(diào)(P<0.05)
　　 2.凋亡:通過流式細(xì)胞術(shù)分析肝細(xì)胞凋亡率顯示,與B2組相比,各時點B3,B4,B5組的肝細(xì)胞凋亡率顯著下降(P<0.05)；B5組凋亡率較B3,B4組明顯下降(P

5、<0.05)；而B3組與B4組之間肝細(xì)胞凋亡率無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.血清AST、ALT:再灌注后各時點B2組中血清AST、ALT明顯高于B1組(P<0.05)；B5組數(shù)據(jù)明顯低于B2組(P<0.05)； B3,B4組血清AST、ALT水平低于B2組,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4.HE染色:與B1組相比,B2組肝組織改變明顯；B3,B4及B5組較B2組肝組織改變減輕；B5組病理學(xué)損傷較B3