豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)SAMP8小鼠認(rèn)知功能及海馬神經(jīng)元的影響.pdf

1、目的:隨著我國人口老齡化進(jìn)程的不斷加快，生育率的下降和人均期望壽命的進(jìn)一步升高，空巢獨(dú)居現(xiàn)象日趨突出，已成為我國老齡化進(jìn)程中不容忽視的重要問題之一。本實(shí)驗(yàn)對(duì)SAMP8小鼠進(jìn)行豐富環(huán)境的干預(yù)，觀察小鼠認(rèn)知功能的改善情況，并觀察了解社會(huì)交往（群居或者獨(dú)居）對(duì)SAMP8小鼠的影響，同時(shí)應(yīng)用光鏡及透射電鏡觀察分析豐富環(huán)境與普通環(huán)境對(duì)SAMP8小鼠海馬神經(jīng)元的影響。以此論證豐富環(huán)境及社會(huì)交往對(duì)老年癡呆患者護(hù)理措施的可靠性和作用機(jī)制，為老年癡呆癥患

2、者的早期干預(yù)及早期預(yù)防提供科學(xué)客觀的依據(jù)。
　　方法:選用健康雄性6月齡快速老化SAMP8小鼠32只，隨機(jī)分為豐富環(huán)境+群居組(A)、豐富環(huán)境+獨(dú)居組(B)、普通環(huán)境+群居組(C)和普通環(huán)境+獨(dú)居組(D)。其他如飼養(yǎng)溫度、光照、飲水、飲食等條件和環(huán)境相同?？偢深A(yù)時(shí)間為6周。
　　1.Morris水迷宮試驗(yàn):環(huán)境干預(yù)結(jié)束后，小鼠在水迷宮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下飼養(yǎng)2d。每天上午8:00～12:00間進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練。定位航行試驗(yàn):將Mo

3、rris水迷宮圓形水池平均分為4個(gè)象限，其中1個(gè)象限中放入一平臺(tái)。小鼠自每個(gè)象限中點(diǎn)面向池壁入水，視頻采集系統(tǒng)跟蹤并記錄小鼠找到平臺(tái)所需的時(shí)間（逃避潛伏期:s）。每天每只小鼠在4個(gè)象限依次訓(xùn)練1次，訓(xùn)練共進(jìn)行5d?？臻g探索試驗(yàn):訓(xùn)練結(jié)束后撤掉水下平臺(tái)，小鼠自距平臺(tái)最遠(yuǎn)的入水點(diǎn)面向池壁入水，觀察小鼠的游泳軌跡并記錄小鼠120s內(nèi)跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)。
　　2.組織切片制備及觀察:每組取4只小鼠，開胸暴露心臟后，將輸液針刺入左心室，同

4、時(shí)剪開右心耳，用0.9％生理鹽水快速?zèng)_洗，沖凈小鼠體內(nèi)血液后用4％多聚甲醛灌注，然后進(jìn)行多聚甲醛后固定。自上丘至視交叉節(jié)段取腦組織，制備四套石蠟切片，分別用于HE染色，尼氏染色，抗NMDAR1免疫組化染色和陰性對(duì)照。
　　3.海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)觀察:灌注取腦后迅速游離海馬，4％預(yù)冷的戊二醛溶液固定，切片，厚約1mm;1h后再次切成＜1mm3的海馬CA1區(qū)組織塊，鋨酸固定，脫水，樹脂包埋，LKB-5超薄切片機(jī)切片，厚度50n

5、m。醋酸鈾—檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察CA1區(qū)神經(jīng)元及其內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果:定位航行實(shí)驗(yàn)中，隨訓(xùn)練天數(shù)增加，各組潛伏期均有縮短;豐富環(huán)境群居組潛伏期明顯短于其他各組(P＜0.05)，空間探索試驗(yàn)中跨越平臺(tái)次數(shù)最多(P＜0.05)。豐富環(huán)境、群居能改善學(xué)習(xí)認(rèn)知功能，與普通環(huán)境、獨(dú)居組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.HE染色結(jié)果:相比其他三組，普通環(huán)境獨(dú)居組海

6、馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理性改變最嚴(yán)重，呈現(xiàn)彌漫性空泡變性，細(xì)胞腫脹，核深染、固縮現(xiàn)象。而豐富環(huán)境群居組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)較其余各組正常，細(xì)胞層數(shù)多，神經(jīng)元排列相對(duì)緊密整齊，層次清楚。
　　3.尼氏染色結(jié)果:豐富環(huán)境群居組海馬神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則，排列整齊且密集，胞漿中尼氏體豐富致密，細(xì)胞數(shù)較多，與其它各組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;豐富環(huán)境獨(dú)居組海馬神經(jīng)元體積較小，尼氏體較稀疏。普通環(huán)境獨(dú)居組海馬神經(jīng)元排列稀疏、紊亂，丟失嚴(yán)重，細(xì)胞核濃密深染

7、、固縮現(xiàn)象明顯，胞漿內(nèi)尼氏體減少，細(xì)胞數(shù)與豐富環(huán)境獨(dú)居組的細(xì)胞數(shù)相比明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。普通環(huán)境群居組的尼氏體較普通環(huán)境獨(dú)居組增多，細(xì)胞數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　4.抗NMDAR1免疫組化染色結(jié)果:普通環(huán)境獨(dú)居組免疫反應(yīng)產(chǎn)物表達(dá)最少，細(xì)胞排列松散，染色最淡;豐富環(huán)境群居組可見NMDAR1蛋白免疫反應(yīng)產(chǎn)物表達(dá)較多，細(xì)胞排列緊密，染色較深。光密度值分析顯示豐富環(huán)境群居組光密度值最高，普通環(huán)

8、境獨(dú)居組光密度值最低。
　　5.電鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)結(jié)果:電鏡觀察豐富環(huán)境群居組神經(jīng)元核膜完整光滑，核內(nèi)染色質(zhì)均勻，電子密度低。豐富環(huán)境獨(dú)居組神經(jīng)元核型不規(guī)則，細(xì)胞器容量較少，有脂褐素的沉積。普通環(huán)境群居組神經(jīng)元核周隙輕度擴(kuò)張，核質(zhì)輕度濃縮，有少量脂褐素沉積。普通環(huán)境獨(dú)居組神經(jīng)元核周隙擴(kuò)張，核膜局部消失融散，胞質(zhì)腫脹發(fā)白，形成不規(guī)則的高電子密度團(tuán)塊;脂褐素沉積，細(xì)胞器明顯減少。
　　結(jié)論:
　　1.豐富環(huán)