紫外線對(duì)HaCaT細(xì)胞結(jié)合珠蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、結(jié)合珠蛋白(haptoglobin，Hp)屬α<,2>-唾液酸糖蛋白，是急性期蛋白之一，主要由肝臟合成，也可在脂肪細(xì)胞、皮膚、脾、肌肉、肺內(nèi)等合成，廣泛分布于人及其他哺乳動(dòng)物體液中。Hp在急性溶血時(shí)，可與血紅蛋白結(jié)合，減少鐵的流失，并保護(hù)腎臟，在抗感染、抗炎癥、損傷組織修復(fù)、抗氧化及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的過(guò)程中亦發(fā)揮重要作用。據(jù)報(bào)道Hp可以抑制培養(yǎng)狀態(tài)下表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞(LC)轉(zhuǎn)變?yōu)榭乖f呈細(xì)胞。我科用原位雜交技術(shù)證實(shí)：角質(zhì)形成細(xì)胞等上皮來(lái)

2、源的細(xì)胞是正常人皮膚組織中表達(dá)Hp mRNA的主要細(xì)胞，同時(shí)在．HaCaT細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)有Hp mKNA及蛋白質(zhì)表達(dá)。紫外線可上調(diào)HaCaT細(xì)胞Hp mRNA表達(dá)，并且隨照射時(shí)間，Hp mRNA表達(dá)呈時(shí)相變化。然而紫外線照射HaCaT細(xì)胞后Hp的蛋白水平表達(dá)情況尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組化方法，探討紫外線對(duì)HaCaT細(xì)胞Hp表達(dá)的影響。 材料和方法： 一、實(shí)驗(yàn)材料 1、IJaCaT細(xì)胞：2000年10月由何春滌

3、教授從德國(guó)the Free University ofBerlin引進(jìn)并凍存于液氮中； 2、主要試劑和物品：鼠抗人Hp mAb，生物素標(biāo)記的羊抗小鼠IgG，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素； 3、主要儀器：細(xì)胞培養(yǎng)箱，SS-03紫外線光療儀。 二、實(shí)驗(yàn)方法 1、365nm UVA 8J/cm<'2>、311nm UVB 80mJ/cm<'2>分別照射HaCaT細(xì)胞。照射后6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)收獲細(xì)胞(

4、每24小時(shí)換新鮮培養(yǎng)液)； 2、用0.25％胰蛋白酶液將培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，并用細(xì)胞離心機(jī)制成細(xì)胞甩片； 3、用抗Hp mAb、生物素標(biāo)記的羊抗小鼠IgG及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素檢測(cè)HaCaT細(xì)胞中的Hp。 結(jié)果： 365nmUVA、311nmUVB照射后6小時(shí)和48小時(shí)的HaCaT細(xì)胞Hp陽(yáng)性。正常對(duì)照HaCaT細(xì)胞和365nmUVA、311nmUVB照射后24小時(shí)的HaCaT細(xì)胞