聚肌胞(poly i-c)誘導肺癌細胞凋亡的分子機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：聚肌苷酸(聚)胞苷酸(簡稱聚肌胞,polyinosinic-polycytidylic acid,poly i:c)是一種人工合成的雙鏈RNA(double-strand RNA,dsRNA)模擬物。本研究利用肺癌細胞系來探討poly i:c誘導肺癌細胞凋亡的分子機制。
　　 方法：將poly i:c轉(zhuǎn)入肺腺癌細胞株A549細胞及小細胞肺癌細胞株NCI-H446細胞中,MTT法檢測poly i:c對肺癌細胞生長抑制作用。A

2、nnexinV FITC／PI雙染檢測poly i:c對A549及NCI—H446細胞的凋亡誘導作用。Real-time PCR方法檢測poly i:c對肺癌細胞中受體TLR3,MDA-5及RIG-Ⅰ mRNA表達的影響,并檢測poly i:c對IFN-β mRNA表達的影響。蛋白免疫印跡法檢測poly i:c作用于A549細胞后凋亡蛋白CaspaSe-3、Bcl-2及Bax的變化,并檢測磷酸化JNK和ERKMAPK蛋白的表達。

3、　　 結(jié)果：MTT結(jié)果提示:poly i:c胞內(nèi)作用明顯抑制肺癌細胞A549和NCI-H446的生長,這種抑制作用具有劑量及時間依賴性。AnnexinV FITC／PI雙染結(jié)果提示:與對照組(PBS組,poly i:c單獨作用組,轉(zhuǎn)染試劑Hipo單獨作用組)比較,poly i:c胞內(nèi)作用可顯著地誘導A549和NCI-H446細胞凋亡(p<0.05)。Real-time PCR結(jié)果提示:poly i:c胞內(nèi)作用6h可明顯上調(diào)A549和N

4、CI-H446細胞的TLR3、RLG—Ⅰ、MDA-5及IFN-β mRNA的表達,與對照組比較均有顯著性統(tǒng)計學意義(p<0.01)。蛋白免疫印跡法結(jié)果發(fā)現(xiàn):在A549細胞中,poly i:c胞內(nèi)刺激可以激活Caspase-3和JNK MAPK通路,同時抑制ERK MAPK通路。
　　 結(jié)論：poly i:c胞內(nèi)作用可以明顯抑制肺癌細胞的生長并誘導肺癌細胞凋亡。poly i:c胞內(nèi)作用可上調(diào)肺癌細胞中TLR3,RIG-Ⅰ,MDA-

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