蚓激酶基因在奶牛乳腺中表達(dá)的研究.pdf

1、本試驗(yàn)構(gòu)建了重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，旨在對(duì)其包裝獲得重組病毒，為最終獲得其轉(zhuǎn)基因奶牛乳腺生物反應(yīng)器提供依據(jù)。 首先，將含有山羊β-酪蛋白基因(β-casein)5’區(qū)調(diào)控序列(BCP)、蚓激酶基因(lumbrokinase)以及牛生長激素基因polyA(BGHpolyA)序列的表達(dá)盒克隆到骨架為Moloney小鼠白血病病毒(缺失基因組)、含有標(biāo)記基因NeoR的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLNCL中，構(gòu)建了蚓激酶重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLN-BCP-

2、LKR。以生理鹽水為溶劑，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染泌乳期奶牛乳腺小葉，收集不同時(shí)段奶樣，采用纖維蛋白平板溶圈法(FibrinAgarosePlateAssay，F(xiàn)APA)檢測其纖溶活性，結(jié)果顯示，BCP作為乳腺特異性啟動(dòng)子能指導(dǎo)目的基因即蚓激酶基因在奶牛乳腺組織實(shí)現(xiàn)有效表達(dá)。 以脂質(zhì)體為轉(zhuǎn)染劑，轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞PA317，對(duì)pLN-BCP-LKR質(zhì)粒進(jìn)行包裝，得到了PI、P2、P3、P4、P5五株可持續(xù)產(chǎn)生病毒顆粒的細(xì)胞克隆。通過體外感染NIH3