槲皮素對人膀胱癌BIU-87細(xì)胞增殖及自噬的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細(xì)胞生長抑制的影響，以及藥物濃度和作用時間對腫瘤細(xì)胞抑制的關(guān)系。
　　 2.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細(xì)胞自噬標(biāo)記物L(fēng)C3表達(dá)的影響，以及自噬在對BIU-87細(xì)胞生長的影響。
　　 3.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細(xì)胞自噬基因Beclin1的影響，以及藥物濃度及作用時間對細(xì)胞自噬表達(dá)的影響，初步探討自噬對腫瘤細(xì)胞的作用。
　　 4.期望為臨床治

2、療膀胱癌提供新的途徑，以及通過自噬途徑對腫瘤細(xì)胞的影響提供治療的理論依據(jù)，并可能為臨床上膀胱癌等腫瘤的綜合治療提供新的中西藥思路。
　　 [方法]
　　 1.人膀胱癌BIU-87細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)將凍存的BIU-87細(xì)胞取出，迅速放入37℃的恒溫水浴中，輕輕緩慢振蕩1分鐘，再將其移入培養(yǎng)瓶中，加入含20％胎牛血清的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)并傳代。
　　 2.MTT(四氮唑藍(lán))檢測法測定Que對BIU-87細(xì)胞增殖的抑

3、制率MTT檢測法測定對數(shù)期生長的BIU-87細(xì)胞，用酶標(biāo)檢測儀以570nm波長進(jìn)行比色，測吸光度值(A)，計算細(xì)胞抑制率。
　　 3.自噬標(biāo)記物L(fēng)C3免疫熒光的檢測運(yùn)用間接免疫熒光法檢測LC3的表達(dá)，一抗和二抗分別與對數(shù)期生長的腫瘤細(xì)胞作用，充分反應(yīng)后避光在熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞染色情況，拍攝LC3的綠色免疫熒光。再用胰酶消化離心后，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的LC3染色表達(dá)率。
　　 4.實(shí)時定量RT-PCR檢測Beclin

4、1-mRNA將QUE不同濃度和時間作用后的BIU-87細(xì)胞，通過實(shí)時定量RT-PCR測定Beclin1基因的相對表達(dá)量，來推測Beclin1對細(xì)胞自噬的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.實(shí)驗(yàn)組的吸光度(A)值明顯低于對照組，不同實(shí)驗(yàn)組的吸光度值隨著QUE濃度和時間的增加而降低(p<0.05)。
　　 2.與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組LC3綠色熒光表達(dá)水平較對照組明顯增強(qiáng)，不同濃度實(shí)驗(yàn)組的LC3綠色熒光強(qiáng)度有明顯差別(p<

5、0.05)；FCM測定的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)量減少、染色率明顯高于對照組(p<0.05)。
　　 3.與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組Beclin1-mRNA表達(dá)水平較對照組明顯增高(p<0.05)，抽提的RNA產(chǎn)物完整，目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增和熔解曲線特異性好。
　　 [結(jié)論]
　　 1.QUE對BIU-87細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，且此作用與QUE的作用時間和劑量有明顯的相關(guān)性，即隨著給藥時間的延長和濃度的增加，對腫瘤細(xì)胞抑