大蒜素聯(lián)合長春新堿對膀胱癌BIU-87細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　探討大蒜素聯(lián)合長春新堿對膀胱癌BIU-87細胞增殖和凋亡的影響,并進一步探討大蒜素聯(lián)合細胞周期特異性化療藥物的作用機制。
　　方法:
　　(1)實驗分為大蒜素組、長春新堿組、大蒜素聯(lián)合長春新堿組,以未用藥物處理的BIU-87細胞為空白對照組,其中大蒜素抑制膀胱癌BIU-87細胞50％的藥物濃度(IC50)為76.26mg/l,長春新堿抑制膀胱癌BIU-87細胞50%的藥物濃度(IC50)為2.34mg/l;

2、
　　(2)應(yīng)用CCK-8法測定膀胱癌BIU-87細胞經(jīng)過處理后的細胞增殖抑制情況;
　　(3)應(yīng)用RT-PCR法檢測BIU-87細胞內(nèi)CDK1和CyclinB1mRNA的表達情況;
　　(4)應(yīng)用免疫細胞化學(xué)法從形態(tài)上半定量檢測細胞內(nèi)CDK1和CyclinB1蛋白的表達情況;
　　(5)應(yīng)用Western blot定量檢測細胞內(nèi)CDK1和CyclinB1蛋白的表達情況;
　　(6)應(yīng)用AnnexinV/P

3、I雙染法流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡的百分比。
　　結(jié)果:
　　(1)膀胱癌BIU-87細胞的增殖抑制率隨大蒜素和長春新堿濃度的增高而增加,具有劑量反應(yīng)關(guān)系(P<0.01);同時能誘導(dǎo)細胞凋亡,聯(lián)合用藥組凋亡率達(54.89±0.27)%,與空白對照組、大蒜素組、長春新堿組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
　　(2)RT-PCR結(jié)果顯示,藥物處理48h后的BIU-87細胞CDK1mRNA表達水平均下調(diào),其中聯(lián)合組

4、(0.15±0.03)%下調(diào)最明顯(P<0.01),與空白對照組(0.81±0.05)%、大蒜素組(0.72±0.02)%、長春新堿組(0.57±0.01)%比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);藥物處理48h后的BIU-87細胞CyclinB1mRNA表達水平也均下調(diào),其中聯(lián)合組(0.12±0.01)%下調(diào)最明顯(P<0.01),與空白對照組(0.83±0.02)%、大蒜素組(0.68±0.05)%、長春新堿組(0.49±0.02)%

5、比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
　　(3)免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果分析顯示:CDK1蛋白在空白對照組、大蒜素組、長春新堿組和聯(lián)合用藥組中IOD分別為(58361.39±1425.03)、(43444.52±870.51)、(19888.49±608.66)、(12778.12±1024.78),聯(lián)合用藥組與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);CyclinB1蛋白在空白對照組、大蒜素組、長春新堿組和聯(lián)合用藥組中IOD

6、分別為(84467.69±8711.08)、(59278.34±7002.85)、(36211.90±5608.84)、(17797.86±2264.12),聯(lián)合用藥組與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
　　(4)Westernblot分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),大蒜素聯(lián)合長春新堿能有效地降低膀胱癌BIU-87細胞株CDK1和CyclinB1蛋白的表達,使CDK1蛋白表達從空白對照組(1.84±0.14)降低到聯(lián)合用藥組的(1.

7、10±0.12),CyclinB1蛋白表達從空白對照組(2.85±0.18)降低到聯(lián)合用藥組的(1.78±0.10),與其余3組相比,聯(lián)合用藥組CDK1和CyclinB1蛋白表達水平均明顯下調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)大蒜素和長春新堿對膀胱癌細胞的生長均有明顯的抑制作用,且呈濃度依賴性;并出現(xiàn)細胞凋亡,聯(lián)合用藥組凋亡率達(54.89±0.27)%,表明大蒜素能增強長春新堿對膀胱癌BIU-87細胞株的殺傷作用,