咪喹莫特對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道重塑的影響及機(jī)制.pdf

1、第一部分哮喘小鼠氣道重塑模型的制備 目的：制備哮喘小鼠氣道重塑模型。 方法：將清潔級(jí)雌性BALB/c純系小鼠30只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、哮喘組和咪喹莫特組，每組10只。于第0、14天以卵白蛋白(OVA)致敏，第24天霧化吸入1％OVA激發(fā)并持續(xù)28d，建立哮喘氣道重塑模型；咪喹莫特組在吸入OVA前2h霧化吸入咪喹莫特30分鐘；正常對(duì)照組以生理鹽水代替OVA。觀察3組小鼠氣道反應(yīng)性，氣道病理學(xué)改變。 結(jié)果：①各組小

2、鼠的基礎(chǔ)呼氣阻力(Re)無差異(P>0.05)，對(duì)生理鹽水激發(fā)無明顯反應(yīng)；注射乙酰膽堿(Ach)進(jìn)行激發(fā)時(shí)，各組小鼠Re隨Ach濃度升高而升高，哮喘組高于對(duì)照組(P<0.05)，咪喹莫特組Re低于哮喘組(P<0.05)，但略高于對(duì)照組；當(dāng)Ach濃度為135ug/kg、405ug/kg時(shí)，哮喘組與對(duì)照組存在明顯差異(均有(P<0.05)。②哮喘組小鼠氣道壁明顯增厚，杯狀細(xì)胞增生，伴黏液高分泌，膠原過度沉積，管壁面積/支氣管管腔的內(nèi)周長(W

3、At/Pi)，支氣管平滑肌面積/管腔的內(nèi)周長(WAm/Pi)，支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)管腔的內(nèi)周長(N/Pi)明顯增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均有P<0.05)。 結(jié)論：本試驗(yàn)成功制備了哮喘小鼠氣道重塑模型，為進(jìn)行下一步研究奠定了基礎(chǔ)。 第二部分咪喹莫特對(duì)哮喘小鼠氣道重塑的影響及機(jī)制 目的：觀察咪喹莫特對(duì)哮喘小鼠氣道重塑和肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smads表達(dá)的影響。 方

4、法：建立哮喘氣道重塑模型，自第14天霧化吸入OVA前2h，干預(yù)組分別霧化吸入布地奈德或咪喹莫特30分鐘。正常對(duì)照組以生理鹽水代替OVA。最后一次霧化結(jié)束后24h，對(duì)肺組織切片行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察病理學(xué)改變、過碘酸雪夫(AB-PAS)染色定量杯狀細(xì)胞百分比及黏液分泌、馬宋氏三色(Masson)染色測(cè)定膠原沉積；運(yùn)用醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測(cè)定WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi；用免疫組化法檢測(cè)肺組織TGF-β1的蛋白表達(dá)；用逆轉(zhuǎn)錄.聚

5、合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)肺組織TGF-β1mRNA以及Smad2，Smad7 mRNA表達(dá)。 結(jié)果：①哮喘組小鼠杯狀細(xì)胞增生明顯，伴黏液高分泌，氣管壁膠原過度沉積，WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi增高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均有P<0.05)；咪喹莫特組杯狀細(xì)胞輕度增生，黏液分泌減少，氣管壁膠原沉積減輕，wAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi下降，與哮喘組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均有P<0.05)。②哮喘組TGF-β1蛋白和mRN

6、A、Smad2mRNA的表達(dá)較對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，咪喹莫特組TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表達(dá)下降，與哮喘組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；哮喘組Smad7mRNA的表達(dá)較對(duì)照組下降(P<0.05)，咪喹莫特可顯著上調(diào)Smad7mRNlA的表達(dá)，與哮喘組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：早期霧化吸入咪喹莫特通過抑制慢性哮喘小鼠肺組織TGF-p1蛋白和mRNA、Sma