犬心房不同部位縫隙連接蛋白40、43、45的分布研究.pdf

1、目的：房性心律失常在臨床上十分常見，嚴重危害人類健康。房性心律失常最常見的是由折返機制引起。電傳導的不均勻性是引起心律失常的重要因素。射頻消融術(shù)的開展提供了房性心律失常最有效的治療手段，同時也表明了房性心律失常不僅是功能性的，而且有解剖學基礎(chǔ)。但迄今為止，房性心律失常的形態(tài)學基礎(chǔ)仍存在較大的爭議性。心律失常不僅在宏觀形態(tài)學上有其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，在微觀蛋白的表達不同也是心律失常的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。正常心臟的心電活動與節(jié)律性收縮，有賴于心肌細胞之間信息通

2、道傳遞的完整性。細胞連接通訊是動物體內(nèi)細胞通訊的重要方式之一，其發(fā)揮細胞之間信息傳遞功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是細胞間隙連接，細胞間隙連接的重要結(jié)構(gòu)成份是連接蛋白。連接蛋白在維持心肌細胞的連接通訊功能、電信號傳導和正常的節(jié)律性的收縮中起重要作用。近年來有關(guān)于心房縫隙連接的研究表明：同一部位縫隙連接的數(shù)量改變或功能下降會使動作電位傳導速度減慢，從而使折返易于發(fā)生，導致心律失常。但關(guān)于心房不同部位縫隙連接蛋白(Cx)分布是否有差別的研究很少。本研究通過

3、觀察犬心房不同部位縫隙連接蛋白的分布特點，進一步探討心房肌細胞在心律失常中的作用。 材料與方法: 一．免疫熒光組織化學染色取成年雜種犬10條，腹腔麻醉。將心臟整體取下。取右心耳、卵圓窩以上右心房內(nèi)光滑部、冠狀靜脈竇口三塊組織，常規(guī)冰凍切片。在加苦味酸的甲醛溶液(2％甲醛+0.2％苦味酸)中固定45分鐘，。用PBS(0.01mmol/L，pH7.5)漂洗3次每次5min。1∶80稀釋的抗Cx40、43、45多克隆抗體(SA

4、NTA CRUZ，USA)4℃孵育過夜4℃。次日經(jīng)：PBS(0.01mmol/L，pH7.5)，震蕩清洗3次每次5min，滴加1∶100稀釋的異硫氰酸熒光黃(FITC)標記的?？寡騃gG二抗室溫孵育0.75h，再經(jīng)PBS震蕩漂洗3次每次5min，用60％緩沖甘油封片。全過程需要避光操作。 二.激光共聚焦顯微鏡技術(shù)激光共聚焦顯微鏡觀察，每一張切片取4～6個視野，將數(shù)字化圖像儲存于計算機。圖象分析方法：應用Image Analysi

5、s程序進行圖像分析，測定Cx40、Cx43和Cx45像素密度，同時測定Cx40、Cx43和Cx45熒光斑面積的大小，以的像素密度和熒光斑面積大小代表Cx40、Cx43和Cx415量的多少，對其進行定量分析。 實驗結(jié)果: 激光共聚焦顯微鏡觀察及圖像分析結(jié)果為：右心房光滑部、CSO心肌Cx43像素密度分別較右心耳組減少了22.2％、40.0％， P均<0.01。右心房光滑部、CSO心肌Cx40像素密度分別較右心耳組減少了29