白藜蘆醇對(duì)豬冷凍精子細(xì)胞凋亡及凋亡途徑的影響.pdf

1、低溫冷凍解凍使液氮保存的豬精子細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的凋亡，常見的凋亡途徑—死亡受體外源性途徑和線粒體內(nèi)源性途徑均可能在凍后精子中發(fā)生，介導(dǎo)凍融精子發(fā)生凋亡而降低精子質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室之前研究基礎(chǔ)上，通過對(duì)凋亡途徑相關(guān)基因的表達(dá)情況研究探索凋亡發(fā)生的可能相關(guān)途徑，并探索在冷凍保護(hù)劑中添加抗氧化劑白藜蘆醇對(duì)冷凍解凍后豬精子細(xì)胞凋亡和凋亡途徑的影響。研究結(jié)果：
　　1.冷凍精子TUNEL染色后的凋亡率（80.4％）與新鮮組（9.7%）相比顯著

2、升高（P<0.05）；與新鮮組精子內(nèi) ROS綠色熒光比率相比，冷凍組（58.2%）亦顯著高于新鮮組（P<0.05）；與新鮮組0.926μ mol/L的ATP濃度相比，冷凍組精子的ATP濃度（0.247μ mol/L）則顯著下降（P<0.05）；qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，冷凍組中TNF-α、Fas、Caspase家族、P53和Bax等基因相對(duì)表達(dá)量升高，其中Fas、P53、TNF-α、caspase8和caspase9等相對(duì)表達(dá)量升高顯

3、著（P<0.05）；BCL-2、BIRC-5、MnSOD、CuZnSOD和SURVIVN等基因相對(duì)表達(dá)量降低，其中BIRC-5、MnSOD、SURVIVN降低顯著（P<0.05）。
　　2.向冷凍劑中添加白藜蘆醇工作液，使其在冷凍劑中的終濃度分別為12.5μM,25μM,50μM和100μM，并設(shè)置0μ M作為空白對(duì)照，比較各組凍融精子活率，頂體和質(zhì)膜完整情況。結(jié)果表明白藜蘆醇終濃度為50μM組的精子活力，質(zhì)膜完整率和頂體完整率均

4、顯著高于其余各添加組（P＜0.05），并顯著高于0μ M組的精子質(zhì)量。精子各指標(biāo)隨著白藜蘆醇濃度增大而升高，呈現(xiàn)濃度依賴性，但當(dāng)白藜蘆醇濃度過高（≥100μ M）時(shí)精子質(zhì)量顯著下降（P＜0.05）。
　　3.凍融精子經(jīng)Caspase原位熒光染色后，添加白藜蘆醇組的實(shí)驗(yàn)組凍融精子凋亡率為29.0%，與未添加白藜蘆醇組的對(duì)照組（86.3%）相比顯著降低（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組58.6%的ROS綠色熒光比率亦顯著低于對(duì)照組（88.4%）