殼寡糖胍鹽酸鹽的微波合成及其對胰島素抵抗大鼠L6骨骼肌細胞GLUT4蛋白的影響研究.pdf

1、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（GLUT4）對于介導葡萄糖的細胞內(nèi)外轉(zhuǎn)運至關(guān)重要，GLUT4表達受損就可能造成機體葡萄糖代謝功能紊亂，進而引發(fā)糖尿病。本論文參照經(jīng)典口服降糖藥甲福明（二甲雙胍鹽酸鹽）的分子結(jié)構(gòu)，以殼寡糖為原料，雙氰胺為胍基化試劑，通過微波合成，制備不同分子量、不同取代度的殼寡糖胍。在此基礎(chǔ)上，通過細胞干預實驗，明晰殼寡糖和殼寡糖胍對胰島素抵抗L6骨骼肌細胞葡萄糖代謝功能的修復作用，并與甲福明和胰島素作比較，深入研究殼寡糖胍對GLUT4

2、蛋白的作用關(guān)系，分析其影響GLUT4蛋白轉(zhuǎn)位的可能信號通路。
　　首先，以不同分子量的殼寡糖（COS）和雙氰胺為反應底物，采用微波液相合成法，合成殼寡糖胍鹽酸鹽（COSG），分析討論了產(chǎn)物的胍取代度和微波功率、反應時間、pH值、原料配比的關(guān)系，并利用GPC、紅外、核磁、元素分析等手段對合成的產(chǎn)物進行了表征。
　　實驗結(jié)果表明：制備的COSG成功引進了雙胍基團，且COSG產(chǎn)物的胍取代度隨微波功率的增大呈先增后減的趨勢。由COS

3、（Mr=1.5KDa）制得的COSG的胍取代度隨反應時間的增加而增大；由COS（Mr=3.0KDa）制得的COSG的胍取代度隨反應時間的增加先增大后減小。隨反應pH值的增大，殼寡糖胍產(chǎn)物的取代度呈下降趨勢。增大雙氰胺的用量，可提高殼寡糖胍產(chǎn)物的取代度，但也增加了產(chǎn)物提純的難度。COSG的相對分子量隨微波時間或pH的增加而降低。
　　其次，通過細胞活力測試實驗分析了不同分子量、不同取代度的COSG的細胞毒性；建立了大鼠L6骨骼肌細胞

4、的胰島素抵抗（IR）模型，以甲福明和胰島素為參照，觀察了不同分子量的COS和制備的不同取代度的COSG對IR細胞的活力和葡萄糖消耗量的影響；研究了各分組對GLUT4表達和Akt磷酸化水平的影響，討論其影響胰島素抵抗L6骨骼肌細胞糖代謝的機制。
　　實驗結(jié)果表明：本實驗選用的COS和所制備的COSG對細胞均無毒性。與甲福明相比，COS和COSG可提高胰島素抵抗L6骨骼肌細胞活力，并促進其攝取葡萄糖的作用，其中COSG的作用最明顯。C