冷鮮雞全產業(yè)鏈彎曲菌生態(tài)分布特征及其冷藏條件下失活模型的建立.pdf

1、彎曲菌屬（Campylobacter spp.）是近四十年來人類公共健康問題的重要病原菌，可導致人類細菌性腹瀉，其中空腸彎曲菌（C.jejuni）和結腸彎曲菌(C.coli)感染最常見。家禽是彎曲菌屬的主要宿主，禽源產品也成為彎曲菌感染人類的主要途徑。因此，了解冷鮮雞全產業(yè)鏈彎曲菌屬生態(tài)分布特征對控制彎曲菌的污染風險極為重要。本研究在彎曲菌分子鑒定和分離培養(yǎng)的基礎上，開展冷鮮雞全產業(yè)鏈“養(yǎng)-宰-售”各環(huán)節(jié)中該菌的生態(tài)分布特征和多位點序列

2、分型(MLST)研究，結合冷藏條件下彎曲菌失活動力學模型，以及有機酸對雞肉中的空腸彎曲菌抑菌效果分析，為在冷鮮雞全產業(yè)鏈中該菌的控制提供數(shù)據(jù)和技術支撐。
　　1.彎曲菌分子檢測方法的建立及增首條件優(yōu)化
　　本研究建立了空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的多重PCR方法以及空腸彎曲菌熒光定量PCR檢測方法。多重PCR方法檢測空腸彎曲菌和結腸彎曲菌特異性好，檢測C.jejuni，C.coli靈敏度為分別為2.2×103CFU/mL和3.8×

3、104CFU/mL。針對空腸彎曲的mapA基因建立了熒光定量PCR方法，該方法特異、快速，檢測下限為102CFU/mL，以細菌點板計數(shù)后抽提的DNA為標準品建立了標準曲線，標準曲線呈良好的線性關系，R2=0.98，斜率為-3.5441，擴增效率為97.6％，可用于臨床樣品的細菌數(shù)檢測。
　　2.彎曲菌冷鮮雞全產業(yè)鏈中的生態(tài)分布特征
　　對浙江省內多個地區(qū)家禽養(yǎng)殖場、家禽屠宰環(huán)境及市售雞肉等樣品進行多重PCR檢測，結果表明，6

4、67份樣品中，空腸彎曲菌和結腸彎曲菌檢出率為分別為32.1％和3.4％;兩種彎曲菌在養(yǎng)殖場、家禽屠宰場和市場的檢出率分別為39.8％(74/186)、25％(79/316)和56.1％(69/123);農貿市場樣品中彎曲菌的檢出率比超市樣高(61.7％ vs11.9％)。通過對家禽屠宰過程中空腸彎曲菌的動態(tài)變化監(jiān)測，屠宰環(huán)節(jié)中的卸貨間、凈膛間、噴淋間的家禽攜帶空腸彎曲菌較高，大于4.0log10CFU，環(huán)境中的包裝間地面、儲物間和冷凍庫

5、貨筐帶菌量多。消毒預冷環(huán)節(jié)從開始屠宰的兩個小時開始可以檢測到空腸彎曲菌，并且細菌數(shù)量隨著屠宰時間的延長而增加，屠宰開始后6h時達到最高，其中預冷池二中空腸彎曲菌濃度可達5.36log10CFU/mL，與雞胴體中細菌攜帶率變化一致。
　　3.空腸彎曲菌分離株的多位點序列分型
　　本研究對來自養(yǎng)雞場、屠宰場以及市場出售冷鮮雞的空腸彎曲菌分離株進行多位點序列分型，79株空腸彎曲菌分離株共有30個不同序列型，其中有13個是新發(fā)現(xiàn)的序

6、列型(43.3％)，包含50株分離株。等位基因值數(shù)量最多的是pgm(15)，最少的為uncA(8)。79株分離株中共有10株有新的等位基因值。所有管家基因中新的等位基因值分別有:aspA（1個），glnA（1個），glyA（2個），pgm（2個），glyA、 tkt和uncA沒有新的等位基因值。不同來源空腸彎曲菌分離株的序列型復雜性存在一定的差異，養(yǎng)殖場樣品的43個菌株有7種序列型，屠宰場樣品7株中有4種序列型，市場樣品的29株中有21

7、種序列型，其中ST298存在于養(yǎng)殖、屠宰環(huán)節(jié)，ST7922存在于屠宰和市場環(huán)節(jié)中。
　　4.冷藏條件下彎曲菌失活動力學模型
　　通過雞肉中的空腸彎曲菌和結腸彎曲菌在6℃條件下30d內失活規(guī)律研究，擬合得到了兩種菌在6℃條件下log-logistic的一級生長預測模型。在4℃、8℃和16℃條件下貯藏8d內，log-logistic模型對空腸彎曲菌的失活規(guī)律依然有較好的擬合性。醋酸、乙酸和檸檬酸三種減菌劑來模擬消毒環(huán)節(jié)，用醋酸浸