纈沙坦對擴張型心肌病大鼠心功能保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：通過對擴張型心肌病大鼠模型心肌組織中心肌鈣調控蛋白[肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2a)、鈣釋放通道(RyR2)、受磷蛋白(PLB)、鈉鈣交換蛋白(NCX1)]進行定量分析，探討血管緊張素Ⅱ-1型受體阻滯劑纈沙坦對擴張型心肌病(DCM)心衰大鼠心臟功能預保護作用及糾正作用的機制。 方法： 實驗一：SD大鼠完全隨機分為3組，DCM模型組(M組，n=20)，預保護組(V組，n=16)，正常對照組(C組，n=16)，M組與V組用

2、阿霉素生理鹽水濃度為2mg/ml溶液進行腹腔內注射建模，劑量為2mg/kg/次，C組予同體積生理鹽水腹腔注射，每周一次，共8周。V組在建模同時給予纈沙坦30mg/kg/d灌胃，共給纈沙坦8周。第9周心臟超聲檢測左室舒張末徑(LVEDD)、左室射血分數(shù)(LVEF)，血流動力學檢測左心室壓峰值(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)。HE及VG染色左心室心肌組織行病理學檢查，測定心肌膠原含量(CVF)的變化。實時熒光定量PCR法測定心肌肌漿

3、網(wǎng)鈣泵(SERCA2a)、鈣釋放通道(RyR2)、受磷蛋白(PLB)、鈉鈣交換蛋白(NCX1)的mRNA表達水平，Western blot法測相關蛋白表達水平。 實驗二：SD大鼠經腹腔注射阿霉素(2mg/kg/周×8周)建立DCM模型。隨機分為DCMX寸照組(M1組，n=22)、纈沙坦治療組(V1組，n=12)、正常對照組(C1組，n=8)，正常給藥對照組(C2組，n=8)。V1組及C2組予纈沙坦30mg/kg.d灌胃，共8周。

4、C1組及M1組予同體積生理鹽水灌胃，共8周。并于實驗第9周行心功能的檢測后處死大鼠，檢測方法同實驗一。 結果： 實驗一： 1．心臟超聲：與C組相比，M組LVEDD的增長值明顯升高[(0.82±0.26)vs(0.37±0.07)mm]，差異有統(tǒng)計學意義。M組LVEF的降低值明顯高于C組[(11.50±1.6)vs(3.88±0.79)％]，差異有統(tǒng)計學意義。V組LVEDD增長值為及LVEF降低值分別為(0.45±

5、0.07)mm、(3.50±0.20)％，均較M組明顯減少。V組LVEDD增長值及LVEF的降低值與C組比較均無統(tǒng)計學意義。 2．血流動力學：與C組相比，M組LVSP降低值及LVEDP的增加值明顯升高[(10.31±2.67)vs(2.39±0.98)mmHg和(12.925±1.04)vs(0.25±0.01)mmHg]，差別有統(tǒng)計學義。V組LVSP的降低值及LVEDP的增加值分別為(5.06±1.39)mmHg、(0.275

6、±0.05)mmHg，均較M組明顯減少，差別有統(tǒng)計學意義。V組LVSP的降低值及LVEDP的增加值與C組比較均無統(tǒng)計學意義。 3．心肌膠原含量：與C組相比，M組心肌膠原明顯升高[(11.138±0.377)％vs(1.94±0.109)％]；V組CVF為(2.5±0.886)％，與C組比較無明顯差別，顯著低于M組。 4．心肌鈣調控蛋白mRNA表達：與C組比，M組SERCA2a、RyR2的mRNA水平顯著下降[(0.29±

7、0.09)vs(0.75±0.10)和(0.31±0.07)vs(0.68±0.14)]；PLB、NCX1的mRNA水平顯著上升[(0.64±0.12)vs(0.30±0.09)和(0.58±0.11)vs(0.21±0.06)]。V組SERCA2a、RyR2的mRNA水平分別為[(0.69±0.12)和(0.57±0.09)]，均較M組升高；V組PLB、NCX1的mRNA水平分別為(0.32±0.08)和(0.31±0.08)，均低于

8、M組。V組SERCA2a、RyR2的mRNA水平及V組PLB、NCX1的mRNA水平與C組比較均無統(tǒng)計學意義。 5．心肌鈣調控蛋白表達：與C組比，M組SERCA2a、RyR2蛋白水平顯著降低[(0.31±0.04)vs(0.69±0.09)和(0.29±0.09)vs(0.61±0.06)]；PLB、NCX1蛋白水平顯著升高[(0.69±0.08)vs(0.36±0.06)和(0.68±0.10)vs(0.37±0.05)]。V

9、組SERCA2a、RyR2蛋白水平分別為(0.54±0.06)和(0.40±0.11)，均高于M組；V組NCX1蛋白水平為(0.41±0.10)，較M組顯著降低；V組PLB蛋白水平為(0.50±0.10)，較M組稍有下降，無統(tǒng)計學意義。V組SERCA2a、RyR2的蛋白水平及V組PLB、NCX1的蛋白表達水平與C組比較均無統(tǒng)計學意義。 實驗二： 1．心臟超聲：M1組LVEDD的增長值明顯高于V1組及C1組[(0.96±0

10、.19)vs(0.37±0.07)和(0.43±0.05)mm]，差異有統(tǒng)計學意義；而C2組LVEDD的增長值為(0.38±0.03)，與C1組比較無統(tǒng)計學意義]；M1組LVEF的降低值明顯高于V1組[(8.62±0.46)vs(-1.57±0.16)mm]差異有統(tǒng)計學意義，而C1組和C2組差別無統(tǒng)計學意義[(1.25±0.05)vs(1.24±0.02)]，M1組LVEF的降低值顯著高于V1組。 2．血流動力學：M1組LVSP

11、降低值較V1組明顯增高[(12.63±3.04)vs(-5.26±0.55)mmHg]，差別有統(tǒng)計學意義。C1組和C2組比較無統(tǒng)計學意義[(2.64±0.73)vs(-0.61±0.17)mmHg]，M1組LVSP的降低值明顯高于C1組。M1組LVEDP的增加值明顯高于C1組和V1組[(3.78±1.85)vs(0.16±0.05)mmHg和(-4.88±0.89)mmHg]，差別有統(tǒng)計學意義；而C2組LVEDP的增加值差為(-0.25

12、±0.09)mmHg，與C1組比較無統(tǒng)計學意義。 3．心肌膠原含量：M1組心肌膠原明顯高于C1組和V1組[(0.85±0.19)％vs(1.935±0.125)％和(4.65±0.697)％]，差別有統(tǒng)計學意義；V1組心肌膠原明顯高于C2組(4.65±0.697)％vs(1.948±0.119)％，差別有統(tǒng)計學意義；而C1組和C2組差別無統(tǒng)計學意義[(1.935±0.125)％vs(1.948±0.119)％]。 4．心

13、肌鈣調控蛋白mRNA表達：與C1組比，M1組SERCA2a、RyR2的mRNA水平顯著下降[(0.38±0.10)vs(0.78±0.11)和(0.36±0.04)vs(0.59±0.14)]；PLB、NCX1的mRNA水平顯著上升[(0.67±0.09)vs(0.36±0.09)和(0.59±0.06)vs(0.24±0.06)]。V1組SERCA2a、RyR2的mRNA水平分別為[(0.60±0.09)和(0.57±0.07)]，均

14、較M1組升高；V1組PLB、NCX1的mRNA水平分別為(0.49±0.12)和(0.35±0.11)，均低于M1組。C2組SERCA2a、RyR2、PLB、NCX1mRNA水平分別為(0.74±0.12)，(0.65±0.17)，(0.31±0.14)，(0.20±0.07)，與C1組相比，均無統(tǒng)計學意義。 5．心肌鈣調控蛋白表達：與C1組比，M組SERCA2a、RyR2蛋白水平顯著降低[(0.38±0.10)vs(0.78±

15、0.11)和(0.36±0.14)vs(0.59±0.14)]；PLB、NCX1蛋白水平顯著升高[(0.67±0.09)vs(0.36±0.09)和(0.59±0.06)vs(0.24±0.06)]。V1組SERCA2a、RyR2蛋白水平分別為[(0.60±0.09)和(0.57±0.07)]，均高于M1組；V1組NCX1蛋白水平為(0.35±0.11)，較M1組顯著降低；V1組PLB蛋白水平為(0.49±0.12)，較M1組稍有下降，

16、無統(tǒng)計學意義。C2組SERCA2a、RyR2、PLB、NCX1蛋白表達水平分別為(0.74±0.12)，(0.65±0.17)，(0.31±0.14)，(0.20±0.07)，與C1組相比，無統(tǒng)計學意義。 結論：阿霉素具有劑量依賴的心臟毒性，可導致心肌鈣調蛋白表達的異常，并在心臟超聲、病理表現(xiàn)等方面特點均類似于人類擴張型心肌病。預防性給予AT-1受體阻滯劑纈沙坦能有效地保護心臟舒縮功能，防止心室重塑，其機制可能與其維持心肌鈣調控