纈沙坦對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌線粒體結(jié)構(gòu)及功能的影響.pdf

1、目的:探討血管緊張素Ⅱ-1型受體阻滯劑纈沙坦對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠充血性心衰預(yù)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 方法:40只SD大鼠完全隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組(C組,n=10),擴(kuò)張型心肌病模型組(M組,n=15),纈沙坦干預(yù)組(V組,n=15)。M組及V組給予多柔比星(2mg·kg-1,每周1次)腹腔內(nèi)注射法建模,Ⅴ組在建模同時(shí)給予纈沙坦(30mg·kg-1·d-1)灌胃,共8周。①心功能檢測(cè):超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室舒張末徑(LVEDD)、左

2、室收縮末內(nèi)徑(LVESD)、左室射血分?jǐn)?shù)(INEF)及左室短軸縮短率(LVFS)；②超微結(jié)構(gòu)檢測(cè):電鏡下觀察各組大鼠心肌線粒體超微結(jié)構(gòu)；③比色法檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)[丙二醛(MDA)/總SOD/CuZn-SOD/Mn-SOD]的改變；④2’,7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(DCFH-DA)熒光探針檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的生成；⑤Rhodamine123染色檢測(cè)各組大鼠心肌線粒體膜電位；⑥比色法檢測(cè)Na+K+-AT

3、P酶及Ca2+Mg2+-ATP酶的水平；⑦比色法測(cè)定各組大鼠心肌線粒體在高鈣誘導(dǎo)下腫脹度；⑧免疫組化檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)第二個(gè)線粒體來源的胱氨酸酶激活劑(Smac)蛋白的表達(dá)；⑨Western blot法測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)及Smac蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 ①各組大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果:與C組相比,M組LVEDD顯著增大[(6.52±0.32)vs(5.83±0.45)mm,P<0.05],V組LN

4、EDD為(6.08±0.54)mm,較C組增大(P>0.05),而較M組減小(P>0.05)；與C組相比,M組LVESD顯著增大[(3.47±0.20)vs(2.55±0.19)mm,P<0.05],Ⅴ組LVESD為(3.02±0.23)mm,較C組顯著增大(P<0.05),而較M組顯著減小(p<0.05)；與C組相比,M組LVEF顯著下降[(83.00±1.31)vs(90.254±2.31)％,P<0.05],V組LVEF為(86.

5、134±1.36)％,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著上升(P<0.05)；與C組相比,M組LVFS顯著下降[(46.88±1.46)vs(56.13±3.64)％,P<0.051,V組LVFS為(50.13±1.36)％,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著上升(P<0.05)。
　　 ②各組大鼠心肌線粒體超微結(jié)構(gòu)觀察:與C組比較,M組線粒體體積明顯增大、嵴斷裂、空泡化,而Ⅴ組線粒體超微結(jié)構(gòu)完整性要較M組明

6、顯改善。
　　 ③各組大鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果:與C組比較,M組MDA水平顯著增高[(1.53±0.32)vs(0.86±0.29)nmol/mgprot,P<0.05],Ⅴ組MDA為(1.04±0.31)nmol/mgprot,較C組增高(P>0.05),而較M組顯著降低(P<0.05)；與C組比較,M組總SOD(T-SOD)水平顯著降低[(75.69±7.51)vs(99.13±11.64)U/mgprot,P<0

7、.05],V組T-SOD為(93.44±9.70)U/mgprot,較C組降低(P>0.05)而較M組顯著增高(P<0.05)；與C組比較,M組CuZn-SOD顯著下降[(68.20±10.42)vs(91.06±14.37)U/mgprot,P<0.05],V組CuZn-SOD為(85.38±5.57)U/mgprot,較C組下降(P>0.05),而較M組顯著改善(P<0.05)；與C組比較,M組Mn-SOD水平顯著降低[(2.99±

8、2.53)vs(6.42±1.75)U/mgprot,P<0.051,V組Mn-SOD為(3.88±1.49)U/mgprot,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組略增高(P>0.05)。
　　 ④各組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ROS檢測(cè)結(jié)果:與C組比較,M組大鼠心肌細(xì)胞ROS熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng),而V組ROS熒光強(qiáng)度較C組增強(qiáng)而較M組減弱。
　　 ⑤各組大鼠心肌線粒體膜電位結(jié)果:與C組比較,M組心肌線粒體Rh123熒光強(qiáng)度顯著下降

9、[(386.93±67.92)vs(548.10±74.91),P<0.05]；V組心肌線粒體Rh123熒光強(qiáng)度為(450.66±45.43),較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著增高(P<0.05)。
　　 ⑥各組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ATP酶檢測(cè)結(jié)果:與C組比較,M組Na+K+-ATP酶顯著降低[(18.77±1.63)vs(26.56±2.99)U/mgprot,P<0.05],V組Na+K+-ATP酶為(21.14±1.

10、48)U/mgprot,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著增高(P<0.05)；與C組比較,M組Ca2+Mg2+-ATP酶顯著降低[(12.29±1.24)vs(19.44±2.75)U/mgprot,P<0.05],Ⅴ組Ca2+Mg2+-ATP酶為(14.01±1.95)U/mgprot,較C組顯著降低(P<0.05),而較M組略增高(P>0.05)。
　　 ⑦各組大鼠心肌線粒體腫脹度檢測(cè)結(jié)果:C組對(duì)高鈣誘發(fā)的腫脹最

11、敏感,而Ⅴ組又較M組對(duì)高鈣刺激的腫脹敏感。
　　 ⑧各組大鼠心肌細(xì)胞中Smac蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:C組大鼠心肌細(xì)胞中,大部分為胞漿藍(lán)染的陰性細(xì)胞,僅見少量的Smac性細(xì)胞；M組和V組大鼠心肌細(xì)胞中Smac陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于C組,胞漿中可見大量的棕黃色顆粒；與M組相比,V組大鼠心肌細(xì)胞中兩種蛋白陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)顯著減少。
　　 ⑨各組大鼠心肌細(xì)胞中Smac及AIF蛋白Western blot檢測(cè)結(jié)果:與C組比較,M組心肌

12、細(xì)胞的Smac蛋白表達(dá)水平顯著增高[(0.69±0.05)vs(0.23±0.08),P<0.05],而V組Rsmac/β-actin的相當(dāng)灰度值為(0.43±0.10),較C組明顯增高(P<0.05),而較M組明顯降低(P<0.05)。與C組比較,M組心肌細(xì)胞的.AIF蛋白表達(dá)水平顯著增高[(0.78±0.06)vs(0.41±0.12),P<0.05],V組RAIF/β-actin的值為(0.52±0.11),較C組略增高(P>0.