Neuritin對Neuralized介導的Notch信號途徑的影響.pdf

1、目的：觀察Neuritin過表達對Neuralized和Neuralized介導的Notch信號通路的影響，明確Neuritin與Neuralized介導的Notch信號通路的關系，探討Neuritin在調控細胞命運，調節(jié)細胞遷移，分化和增殖中的作用機制。 方法： （1）運剛免疫共沉淀技術（immunoprecipitation，IP）驗證Neuritin與Neuralized之間的相互作用 ①構建pcDNA3.

2、1-his/myc-neuritin質粒pcDNA3.1-flag-neuralized質粒； ②利用脂質體介導法將上述真核表達載體共轉染至HEK293細胞； ③采用免疫共沉淀技術（正向和反向）檢測上述轉染細胞中Neuritin和Neuralized的相互作用。 （2）利用真核表達技術，觀察Neuritin過表達對Neuralized介導的Notch信號通路的影響 ①構建pEGFP-C1-JAG1-TB熒

3、光表達載體； ②利用脂質體介導法將pIRES-HA-Jag1或pEGFP-C1-JAG1-TB質粒，bpcDNA3.1-flag-neuralized質粒，pcDNA3.1-his-neuritin質粒，分組轉染至HEK293細胞； ③用western-blot技術檢測三組細胞中Neuritin，Neuralized和JAG1的表達情況； ④利用細胞內定位技術觀察三組細胞中Neuritin蛋白對JAG1-TB蛋白

4、內吞的影響。 結果： （1）Neurtitin蛋白和Neuralized蛋白免疫共沉淀檢測結果顯示：細胞內Neuritin蛋白可Neuralized蛋白發(fā)生相互作用； （2）利用western-blot技術檢測Neuritin蛋白對Neuralized介導的Notch配體蛋白JAG1表達水平的影響結果顯示：Neuritin蛋白能夠抑制Neuralized蛋白介導的JAG1蛋白表達下調； （3）利用細胞內定

5、位技術觀察三組細胞中Neuritin對Neuralized介導的JAG1內吞的影響的實驗結果顯示：Neuritin蛋白可以部分的抑制JAG1蛋白的內吞。 結論： （1）Neuritin蛋白能夠與Neuralized蛋白相互作用； （2）Neuritin蛋白能夠抑制Neuralized蛋白介導的JAG1蛋白表達下調； （3）Neuritin蛋白能夠部分抑制Neuralized蛋白介導的JAG1-TB蛋白內吞