玉米幼芽提取物對(duì)小鼠皮膚UVA氧化損傷的防護(hù)研究.pdf

1、建立小鼠皮膚長(zhǎng)波紫外線(UVA)氧化損傷的動(dòng)物模型和真皮成纖維細(xì)胞UVA單次氧化損傷的細(xì)胞模型，從動(dòng)物整體和體外培養(yǎng)細(xì)胞兩個(gè)層次上探討UVA照射下玉米幼芽提取物(EMP)對(duì)小鼠皮膚氧化損傷的防護(hù)作用。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照、UVA模型、EMP+UVA和VitC+UVA 4個(gè)組；透射電鏡觀察各組小鼠皮膚的超微結(jié)構(gòu)；生化法測(cè)定小鼠皮膚組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照、

2、UVA模型、EMP+UVA和NAC+UVA 4個(gè)組；以DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法培養(yǎng)真皮成纖維細(xì)胞；臺(tái)盼藍(lán)染色和MTT比色法獲得UVA照射劑量-細(xì)胞活力曲線，根據(jù)曲線建立UVA氧化損傷細(xì)胞模型；HE染色和相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；生化法測(cè)定SOD、CAT、GSH-Px酶活性和MDA含量以及細(xì)胞內(nèi)GSH/GSSG比值變化；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)BCL-2蛋白水平變化和核轉(zhuǎn)錄因子NF-кBp65的細(xì)胞核轉(zhuǎn)位；

3、TRIZOL法從細(xì)胞中抽提總的RNA，RT-PCR半定量檢測(cè)MMP-2和MMP-9的mRNA表達(dá)變化。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1566 J/cm<'2>(共30 d)劑量的UVA照射后，小鼠表皮細(xì)胞和真皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡變性和線粒體損傷，表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡特征，加EMP保護(hù)的小鼠皮膚細(xì)胞損傷程度減輕；EMP可顯著提高UVA輻射小鼠皮膚組織中的SOD活性(P<0.01)和CAT活性(P<0.05)，降低MDA含量(P<0.05)，與VitC

4、的抗氧化作用相一致。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：消化法比組織法獲取細(xì)胞效率更高，適合于成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；7.5 J/cm<'2>的UVA劑量照射細(xì)胞可使細(xì)胞發(fā)生皺縮、變圓，細(xì)胞核濃縮，細(xì)胞貼壁能力下降，照射前加EMP保護(hù)的細(xì)胞有輕微的萎縮，細(xì)胞形態(tài)基本正常；EMP可顯著提高UVA輻射成纖維細(xì)胞中的GSH/GSSG比值(P<0.01)，以及SOD、CAT和GSH-Px的活性(P<0.01)，降低MDA含量(P<0.01)；與UVA模型

5、組細(xì)胞相比，EMP+UVA組細(xì)胞中BCL-2蛋白可以維持在較高的水平；UVA模型組細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-кBp65發(fā)生明顯的細(xì)胞核轉(zhuǎn)位，EMP+UVA組細(xì)胞轉(zhuǎn)位程度降低；EMP保護(hù)細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的mRNA表達(dá)量較UVA模型組細(xì)胞有顯著的降低(P<0.01)，與NAC的抗氧化效果類似。 綜合以上結(jié)果，EMP能夠防止UVA誘導(dǎo)的皮膚生物大分子的氧化損傷，維持皮膚組織細(xì)胞形態(tài)和功能的完整性；其機(jī)制可能是：EMP能夠抑制細(xì)胞