轉(zhuǎn)化生長因子β1基因多態(tài)性與慢性移植腎腎病關(guān)系的研究.pdf

1、慢性移植腎腎病(chronicallograftnephropathy，CAN)是移植腎慢性失功的最主要原因，細(xì)胞因子在慢性移植腎腎病發(fā)生中細(xì)胞活化、遷移、增殖和效應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用，其最終表現(xiàn)為器官實(shí)質(zhì)和血管的纖維化以及功能喪失。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggrowthfactor-beta1，TGF-β1)是目前己知的最重要的具有致纖維化作用的細(xì)胞因子。TGF-β1基因多態(tài)性決定TGF-β1的個(gè)體水平。在TGF-β1

2、基因上信號(hào)序列區(qū)的+869和+915位置處存在著對(duì)應(yīng)的T/C、G/C的變化。TGF-β1等位基因型別共有9種，分別為T/TG/G、T/CG/G、T/CG/C、C/CG/G、T/TG/C、C/CG/C、C/CC/C、T/TC/C幫T/CC/C，根據(jù)細(xì)胞因子基因型與血清細(xì)胞因子水平的關(guān)系，臨床上將細(xì)胞因子的合成量分為高、中、低三種水平。TGF-β1等位基因分為3型：T/TG/G、T/CG/G為高分泌型，T/CG/C、C/CG/G和T/TG/

3、C為中分泌型，C/CG/C、C/CC/C、T/TC/C和T/CC/C為低分泌型。高分泌型等位基因純合子產(chǎn)生細(xì)胞因子量最高；低分泌型等位基因純合子產(chǎn)生細(xì)胞因子量最低；高分泌型和低分泌型等位基因的雜合子產(chǎn)生中等量細(xì)胞因子。血清TGF-β1濃度高產(chǎn)量型是中低產(chǎn)量型的3～10倍。各種合成量的細(xì)胞因子對(duì)許多疾病的發(fā)生及病理過程產(chǎn)生不同的影響。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道細(xì)胞因子基因多態(tài)性對(duì)心、腎、肝、肺等器官的移植效果均有影響。國內(nèi)研究顯示TGF-β1基因多態(tài)性與

4、移植腎急性排斥反應(yīng)沒有明顯聯(lián)系，但與慢性移植腎腎病的關(guān)系尚未見報(bào)道。 目的：本研究探討TGF-β1基因多態(tài)性與慢性移植腎腎病的關(guān)系。 方法：選取本單位經(jīng)臨床表現(xiàn)及病理確診為慢性移植腎腎病的50例患者作為慢性移植腎腎病組(CAN組)，同時(shí)選取50例腎移植術(shù)后移植腎功正?；颊咦鳛閷?duì)照組。對(duì)兩組患者的TGF-β1“+869”和“+915”遺傳突變位點(diǎn)的基因型進(jìn)行測定。采用蛋白酶K消化酚氯仿抽提法自CAN組石蠟標(biāo)本，全血DNA提

5、取試劑盒自對(duì)照組靜脈血標(biāo)本中提取DNA模板。使用Primerexpress2.0生物軟件設(shè)計(jì)合成引物，對(duì)抽提的DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物純化，測序儀測序得出TGF-β1基因型。分析兩組高產(chǎn)量基因型的百分率差異。再通過免疫組化染色(SABC法)檢測CAN組移植腎中TGF-β1表達(dá)，對(duì)免疫組化染色結(jié)果觀察判定，分析TGF-β1基因表現(xiàn)型為高產(chǎn)量及中低產(chǎn)量組中TGF-β1染色強(qiáng)度的差異。進(jìn)一步對(duì)CAN組移植腎組織切片行HE染色，按照B

6、anff97病理診斷分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，分析TGF-β1基因表現(xiàn)型為高產(chǎn)量及中低產(chǎn)量組中移植腎纖維程度的差異。 結(jié)果：CAN組中TGF-β1基因表現(xiàn)型為高產(chǎn)量者為70％(35/50)，對(duì)照組高產(chǎn)量者為38％(19/50)，CAN組中高產(chǎn)量型占優(yōu)勢，兩組相比有顯著差異(χ2=10.306P=0.001)。為了找出其它影響慢性移植腎腎病的可能因素，從而為在研究TGF-β1基因型多態(tài)性對(duì)慢性移植腎腎病的影響時(shí)剔除干擾因素，我們對(duì)可能影響

7、慢性移植腎腎病的因素，包括性別、年齡、HLA配型、移植腎功能延遲恢復(fù)、急性排斥反應(yīng)、免疫抑制維持方案、巨細(xì)胞病毒感染、高血壓、高血脂等進(jìn)行比較篩選，發(fā)現(xiàn)僅有急性排斥反應(yīng)在兩組間差異可能有意義，CAN組為36％(18/50)，對(duì)照組為20％(10/50)，兩組相比(χ2=3.175P=0.075)。為了避免急性排斥反應(yīng)干擾TGF-β1基因多態(tài)性對(duì)慢性移植腎腎病發(fā)生影響的結(jié)果，依據(jù)有無急性排斥反應(yīng)再次分組，分析TGF-β1高及中低產(chǎn)量型在C

8、AN組及對(duì)照組中分布顯示：有急性排斥反應(yīng)時(shí)，CAN組中TGF-β1高產(chǎn)量者為72.2％(13/18)，對(duì)照組高產(chǎn)量者為30％(3/10)，兩組Fisher精確概率分析有差異(P=0.049)。無急性排斥反應(yīng)時(shí)，CAN組中TGF-β1高產(chǎn)量者為68.8％(22/32)，對(duì)照組高產(chǎn)量者為40％(16/40)，兩組相比有差異(χ2=5.896P=0.015)。行Mantel-Haenszel檢驗(yàn)(p=0.542)顯示有無急性排斥反應(yīng)對(duì)CAN組

9、及對(duì)照組中TGF-β1高產(chǎn)量率無影響，CAN組中高產(chǎn)量率明顯高于對(duì)照組。CAN組免疫組化染色：TGF-β1陽性著色表現(xiàn)為胞膜及胞漿染成淺黃色、棕黃色、棕褐色，用半定量法估計(jì)TGF-β1染色。無陽性細(xì)胞為(-)，陽性細(xì)胞數(shù)占25％以下為(+)，占25-50％為(++)，大于50％為(+++)，大于75％為(++++)。高產(chǎn)量組TGF-β1染色強(qiáng)度++為2例，+++為10例，++++為23例。中、低產(chǎn)量組TGF-β1染色強(qiáng)度++為6例，++

10、+為8例，++++為1例。Mann-Whitney檢驗(yàn)顯示兩組有差異。TGF-β1高產(chǎn)量型在移植腎組織中有較高轉(zhuǎn)化生長因子沉積，染色深。依照Banff97病理診斷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)輕度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅱ級(jí)中度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅲ級(jí)重度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮、消失伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變。對(duì)移植腎組織HE染色切片進(jìn)行分級(jí)，高產(chǎn)量組Ⅰ級(jí)4例，Ⅱ級(jí)10例，Ⅲ級(jí)2

11、1例，中、低產(chǎn)量組Ⅰ級(jí)4例，Ⅱ級(jí)7例，Ⅲ級(jí)4例。Mann-Whitney檢驗(yàn)顯示兩組有差異。高產(chǎn)量組移植腎病理改變重于中、低產(chǎn)量組。 結(jié)論：慢性移植腎腎病中TGF-β1基因表現(xiàn)型以高產(chǎn)量為主，高產(chǎn)量率顯著高于移植腎功正?；颊?，提示TGF-β1高產(chǎn)量型與慢性移植腎腎病具有相關(guān)性。在慢性移植腎腎病腎組織中有大量轉(zhuǎn)化生長因子沉積，高產(chǎn)量型高于中低產(chǎn)量型表達(dá)。分析TGF-β1高產(chǎn)量型及中低產(chǎn)量型中移植腎病理改變顯示，高產(chǎn)量組纖維化程度重

12、于中低產(chǎn)量組，轉(zhuǎn)化生長因子的表達(dá)強(qiáng)度與腎臟纖維化程度相關(guān)。可以把TGF-β1基因型作為預(yù)測移植后慢性移植腎腎病發(fā)生危險(xiǎn)程度的一個(gè)指標(biāo)。對(duì)于TGF-β1基因高產(chǎn)量型的患者應(yīng)于移植后不用那些能夠增加TGF-β1的藥物或減少其用量，以利于移植腎的長期存活。通過確定移植受者的細(xì)胞因子基因型，可了解血清細(xì)胞因子的大致水平，有可能在移植前評(píng)估移植后患者發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的危險(xiǎn)程度，預(yù)測受者對(duì)移植物的反應(yīng)情況，從而更加合理地指導(dǎo)使用不同的免疫抑制藥物和