PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)哮喘患者外周血Th1-Th2失衡影響的臨床研究.pdf

1、目的：初步了解磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)在急性發(fā)作期哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中的活化情況，并觀察其特異性抑制劑Wortmannin(渥曼青霉素)對(duì)Th1、Th2型細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4表達(dá)的影響，初步探討PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在哮喘患者T細(xì)胞免疫紊亂中，參與Th1/Th2失衡的作用機(jī)制。 方法：以20例急性發(fā)作期哮喘患者(男性12例，女性8例，平均年齡：30±

2、9.6歲)作為實(shí)驗(yàn)組，15例健康人(男性9例，女性6例，平均年齡28±8.9歲)為對(duì)照組。哮喘患者進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)前未經(jīng)過激素治療；健康者經(jīng)自愿體檢，近期無感染及過敏性疾病史。每一研究對(duì)象于清晨空腹時(shí)，無菌肝素抗凝抽取靜脈血5ml(哮喘患者于使用激素前)，F(xiàn)icoll密度梯度離心法提取獲得PBMC。半定量RT-PER法測(cè)定PBMC中PI3KmRNA的表達(dá)，ELISA法測(cè)定未經(jīng)Wortmannin干預(yù)及不同濃度組Wortmannin處理的PBM

3、C培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4水平。 結(jié)果：(1)電泳結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)中所有擴(kuò)增產(chǎn)物都出現(xiàn)了內(nèi)參β-actin基因的253bp擴(kuò)增帶和PI3K基因的500bp擴(kuò)增帶，哮喘組PI3K基因擴(kuò)增帶亮度明顯強(qiáng)于對(duì)照組。半定量結(jié)果分析顯示：正常對(duì)照組PBMC中PI3KmRNA的表達(dá)較低(0.521±0.133)，急性發(fā)作期哮喘患者PBMC中P13KmRNA的表達(dá)(0.649±0.143)則高于正常對(duì)照組，表達(dá)差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

4、.05)。(2)上清液中IFN-γ、IL-4檢測(cè)：哮喘患者PBMC培養(yǎng)上清液中IFN-γ水平低下、IL-4水平升高，與對(duì)照組比較差異均有顯著性(P<0.01和P<0.01)；同時(shí)加入不同濃度Wortmannin共培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)均濃度依賴性地抑制了哮喘組及對(duì)照組IL-4的產(chǎn)生(P<0.05或P<0.01)，而同組不同濃度梯度組間比較IFN-γ產(chǎn)生差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論： (1)急性發(fā)作期哮喘患者PBMC PI3Km

5、RNA表達(dá)明顯增高，提示PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化參與了哮喘的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制。(2)Wortmannin能濃度依賴性地抑制由CD3mAb誘導(dǎo)的哮喘組和對(duì)照組PBMC培養(yǎng)上清液中IL-4的產(chǎn)生，而對(duì)IFN-γ產(chǎn)生無明顯影響。說明Wortmannin對(duì)Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生無抑制作用，而對(duì)Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生有抑制作用。由此推論：PI3K過度活化對(duì)Th1型細(xì)胞因子IFN-γ影響不明顯，有可能主要是介導(dǎo)Th2型細(xì)胞因子IL-4的產(chǎn)生而參與Th