十全大補(bǔ)湯對(duì)小鼠移植性肉瘤S180模型形態(tài)機(jī)能學(xué)研究.pdf

1、目的:本課題通過建立昆明種(KM)小鼠移植性肉瘤S180模型,觀察腫瘤和十全大補(bǔ)湯、異環(huán)磷酰胺(Ifosfamide,IFO)對(duì)小鼠各器官組織的病理組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的影響;進(jìn)而探討腫瘤和十全大補(bǔ)湯、IFO對(duì)小鼠各器官組織的“細(xì)胞器質(zhì)性改變”和機(jī)能狀態(tài)的影響。
　　方法:應(yīng)用均衡隨機(jī)法將40只清潔級(jí)KM雌性小鼠,分為4組(空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、十全大補(bǔ)湯組、IFO組),各組小鼠均為10只,所有小鼠先在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)1-2天,適應(yīng)室內(nèi)環(huán)

2、境后,無菌條件下用一次性注射器抽取S180腹水瘤種鼠的乳白色腹水,置于1ml無菌離心管內(nèi),然后用生理鹽水(NS)稀釋后,1000r/min離心5min,傾出上清。如此反復(fù)沖洗2-3次后,最后按一定比例加入NS,吸管充分吹打均勻,加NS配制成細(xì)胞密度為6.4×106/ml瘤細(xì)胞懸液,種植于模型對(duì)照組、十全大補(bǔ)湯組、IFO組小鼠的右前肢腋窩皮下,每只小鼠注射0.2ml(含有1.28×106個(gè)瘤細(xì)胞)。接種S180肉瘤細(xì)胞后的第6天,在小鼠的

3、右前肢腋窩皮下可觸及實(shí)質(zhì)性包塊,大小約100-300mm3。說明小鼠移植性肉瘤S180模型成功建立。
　　模型成功建立后,空白對(duì)照組和模型對(duì)照組小鼠每天灌服NS,十全大補(bǔ)組小鼠每天灌服十全大補(bǔ)湯藥液,IFO組小鼠每天腹腔注射IFO,所有小鼠均按照0.2ml/10g的標(biāo)準(zhǔn)給藥,各組均連續(xù)用藥17天。于造模成功后第17天,稱取小鼠體重,用10％的水合氯醛(按照10ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)給藥)腹腔注射麻醉小鼠,完整剝離小鼠腫瘤、脾臟、胸腺、心

4、、肝、腎、腦、腎上腺、選取部分腸,肉眼觀察各器官并剔除粘附在臟器上的脂肪和筋膜,用濾紙吸去表面血液或體液后精密稱腫瘤、脾臟、胸腺重量。按照要求完成透射電鏡和光鏡樣本的取材,電鏡標(biāo)本經(jīng)固定、脫水及滲透、包埋及聚合、半薄切片及超薄切片、醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染色后,于透射電鏡下觀察各組織的超微結(jié)構(gòu)改變。光鏡標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟浸蠟、切片、H-E染色后,于光學(xué)顯微鏡下觀察各器官和腫瘤的組織學(xué)改變。
　　結(jié)果

5、:(1)成功復(fù)制小鼠移植性肉瘤S180模型;(2)空白對(duì)照組和十全大補(bǔ)湯組小鼠活潑,皮毛有光澤,無豎毛現(xiàn)象,模型對(duì)照組和IFO組小鼠飲食減少,毛發(fā)雜亂無光澤,豎毛現(xiàn)象明顯,活動(dòng)也明顯減少,常擁擠在一起,IFO組小鼠整體狀態(tài)更差;(3)模型對(duì)照組與IFO組、十全大補(bǔ)湯組的腫瘤重量組間差異有顯著意義(P<0.05),其中,IFO組的腫瘤重量明顯輕于模型對(duì)照組,IFO和十全大補(bǔ)湯抑瘤率分別為48.2%、8.8%,IFO抑制腫瘤生長(zhǎng)的效果優(yōu)于十

6、全大補(bǔ)湯;(4)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組和IFO組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均明顯下降(P<0.05),十全大補(bǔ)湯組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)上升,十全大補(bǔ)湯組的脾指數(shù)與模型對(duì)照組相比呈顯著上升(P<0.01)。(5)病理定量分析顯示,在腫瘤組織和壞死組織體密度(Vv)、胸腺皮質(zhì)厚度、脾小結(jié)大小和脾臟胸腺中淋巴細(xì)胞個(gè)數(shù)方面,十全大補(bǔ)湯組與模型對(duì)照組和IFO組之間差異顯著(P<0.05)。(6)病理半定量分析顯示,十全大補(bǔ)湯組小鼠各器官的細(xì)胞器質(zhì)性損

7、傷程度均輕于模型對(duì)照組和IFO組(P<0.05),十全大補(bǔ)湯能夠促進(jìn)細(xì)胞器質(zhì)性損傷的恢復(fù)。(7)在超微結(jié)構(gòu)水平上,實(shí)驗(yàn)各組小鼠的各器官的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的變化差異顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)小鼠移植性S180肉瘤模型復(fù)制成功率高,實(shí)驗(yàn)周期相對(duì)不長(zhǎng),在短時(shí)間內(nèi)即可判定抗腫瘤藥物效果,是一種較理想的實(shí)驗(yàn)研究方法。(2)IFO能夠明顯抑制腫瘤生長(zhǎng),但對(duì)小鼠的整體機(jī)能狀況損傷嚴(yán)重,顯著降低胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),導(dǎo)致多數(shù)器官發(fā)生萎縮