氟對(duì)小鼠早期胚胎DNA甲基化的影響.pdf

1、氟中毒引起的非骨相組織損害已引起人們的廣泛關(guān)注，其中氟的生殖毒性及對(duì)子代健康的影響已成為研究熱點(diǎn)，而分子機(jī)理尚不完全清楚。飲水型氟中毒是由于長期大量飲用含氟量過高的水所引起的一種全身性疾病，是慢性地方性氟中毒的一種類型。本研究采用小鼠飲用含氟水（100 mg/L）為動(dòng)物模型，研究了氟對(duì)小鼠肝臟、精子和早期胚胎中基因組DNA甲基化和印跡基因DNA甲基化的影響，從表觀遺傳學(xué)的角度探討氟的生殖毒性。
　　1氟對(duì)小鼠肝臟DNA甲基化的影響

2、
　　為了解氟對(duì)小鼠肝臟中基因組DNA甲基化和逆轉(zhuǎn)座子LINE1基因的DNA甲基化的影響，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)和偏重亞硫酸氫鹽測(cè)序法(BSP)分析了雄鼠連續(xù)飲用含氟水35d后，肝臟中LINE1基因和基因組DNA甲基化的水平。結(jié)果顯示，處理組和對(duì)照組中的基因組DNA甲基化水平分別是1.20％±0.11％和1.20％±0.14％，差異不顯著;LINE1的DNA甲基化水平在處理組和對(duì)照組分別是85.00％±3.15％和81.87

3、％±5.39％，差異不顯著。表明雄鼠連續(xù)飲用含氟水35d不會(huì)直接影響肝臟中DNA甲基化水平。
　　2懷孕雌鼠攝入氟對(duì)早期胚胎DNA甲基化的影響
　　為了解早期孕鼠攝入氟對(duì)胚胎DNA甲基化的影響，應(yīng)用BSP和結(jié)合偏重亞硫酸氫鹽的限制性酶切分析(COBRA)分析了懷孕雌鼠連續(xù)攝入氟2d后，早期胚胎中印跡基因和逆轉(zhuǎn)座子LINE1基因的DNA甲基化的水平。結(jié)果顯示，氟暴露使早期胚胎H19的DNA甲基化從對(duì)照組中的49.33％±7.6

4、0％下降為9.12％±5.28％，差異顯著;Peg3的DNA甲基化在處理組和對(duì)照組分別是4.14％±0.32％和4.66％±0.45％，差異不顯著;LINE1的DNA甲基化在處理組和對(duì)照組分別是42.33％±7.99％和41.67％±7.42％，差異不顯著，酶切結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了測(cè)序所得的結(jié)果。表明孕鼠攝入氟會(huì)直接導(dǎo)致胚胎中父本印跡基因H19的DNA甲基化異常，而不會(huì)對(duì)母本印跡基因Peg3和逆轉(zhuǎn)座子LINE1的DNA甲基化產(chǎn)生顯著性影響。

5、
　　3雄鼠攝入氟對(duì)受精后早期胚胎DNA甲基化的影響
　　為了解雄鼠攝入氟對(duì)受精后早期胚胎DNA甲基化的影響，應(yīng)用BSP和COBRA分析了攝入氟的雄鼠與雌鼠交配后，早期胚胎中印跡基因和逆轉(zhuǎn)座子LINE1基因DNA甲基化的水平。結(jié)果顯示，受氟的影響，H19的DNA甲基化水平從原本的49.33％±7.60％下降為27.00％±8.54％，差異顯著;Peg3的DNA甲基化水平，從對(duì)照組的4.66％±0.45％升高到處理組的96.5

6、5％±0％，差異顯著;LINE1基因DNA甲基化水平在處理組和對(duì)照組分別是45.50％±7.66％和41.67％±7.42％，差異不顯著，酶切結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了測(cè)序所得的結(jié)果。表明雄鼠攝入氟會(huì)導(dǎo)致與之交配的雌鼠所得胚胎中H19和Peg3的DNA甲基化異常，而不會(huì)對(duì)LINE1基因的DNA甲基化產(chǎn)生顯著性影響。
　　4氟對(duì)小鼠精子DNA甲基化影響的研究
　　為了解氟對(duì)精子DNA甲基化的影響，應(yīng)用ELISA和BSP分析了雄鼠連續(xù)飲用

7、含氟水35d后，精子中基因組DNA甲基化水平和H19、Rasgrf1、Peg3、LINE1基因的DNA甲基化水平。結(jié)果顯示，H19的DNA甲基化水平在處理組和對(duì)照組分別是88.63％±5.14％和91.11％±0.95％;Rasgrf1的DNA甲基化水平在處理組和對(duì)照組分別是97.50％±1.12％和97.78％±1.21％; Peg3的DNA甲基化水平在處理組和對(duì)照組分別是0.71％±0.014％和0％±0％;LINE1的DNA甲基化