家雞胚胎早期發(fā)育過程中DNA甲基化的MSAP分析.pdf

1、表觀遺傳學(xué)即沒有DNA序列變化的、可遺傳的基因表達(dá)改變。DNA甲基化即為表觀遺傳中的一個重要組成部分。現(xiàn)有研究表明，DNA甲基化水平在胚胎發(fā)育中存在一個變化過程，并且會影響如性狀分化等胚胎發(fā)育過程中的重要進(jìn)程。通過MSAP（甲基敏感擴增片段多態(tài)性 methylation sensitive amplified polymorphism）技術(shù)分析家雞胚胎發(fā)育過程中的甲基化位點變化，首先能夠?qū)⑦@一方法應(yīng)用于家禽胚胎發(fā)育分析，得到表觀遺傳學(xué)變

2、化的重要信息，其次，能首次得到家雞胚胎的基因組甲基化程度變化趨勢以及不同組織器官間甲基化程度差異等數(shù)據(jù)。通過這一過程，可以揭示家雞胚胎發(fā)育過程中DNA甲基化的動態(tài)變化規(guī)律和器官發(fā)育變化間可能存在的關(guān)系，為進(jìn)一步研究影響經(jīng)濟性狀的DNA甲基化變化或者其他表觀修飾打下基礎(chǔ)。 本研究以不同時間段的家雞胚胎為試驗材料，提取基因組DNA，采用MSAP對其甲基化水平進(jìn)行了初步檢測：共計發(fā)現(xiàn)甲基化位點880個，不存在單鏈外側(cè)和雙鏈內(nèi)測甲基化位

3、點1332個。結(jié)果顯示CCGG位點單鏈外側(cè)的胞嘧啶甲基化位點比例為20.48％，雙鏈CCGG位點的內(nèi)側(cè)胞嘧啶甲基化19.30％，兩者總比例為39.78％，其中3天時期甲基化比例為32.96％，7天時期甲基化比例為38.48％，12天時期甲基化比例為39.45％，15天時期甲基化比例為47.73％?？梢钥闯觯摷谆兓请S著胚胎發(fā)育而呈升高趨勢。 本研究以15天不同組織器官的家雞胚胎為試驗材料，提取基因組DNA，采用甲基敏感擴增

4、片段多態(tài)性對其甲基化水平進(jìn)行了初步檢測：共計發(fā)現(xiàn)甲基化位點1379個，不存在單鏈外側(cè)和雙鏈內(nèi)測甲基化位點1553個。結(jié)果初步顯示CCGG位點單鏈外側(cè)的胞嘧啶甲基化位點比例為23.67％，雙鏈CCGG位點的內(nèi)側(cè)胞嘧啶甲基化23.36％，兩者總比例為47.03％。其中胸肌組織甲基化比例為47.73％，心臟組織甲基化比例為42.74％，肺臟組織甲基化比例為39.45％，腎臟組織甲基化比例為46.64％，肝臟組織甲基化比例為52.48％。可以看

5、出，肝臟組織甲基化比例較高而肺臟較低，其它較為接近。 總體來說，家雞胚胎甲基化程度隨時間發(fā)育呈現(xiàn)遞增趨勢：其中從12天到15天日齡時甲基化變化程度比較高，而在5到12天期間是甲基化程度變化不明顯。同時，家雞胚胎甲基化呈現(xiàn)較高的組織特異性差異，其中肝臟部分甲基化程度較高，肺臟組織較低，其它部分則較為接近。胚胎甲基化的時間線變化和胚胎體重增加相符，胚胎甲基化的組織特異性變化也符合胚胎的器官發(fā)育的動態(tài)過程。并且也證實甲基化高峰期很可能