鹽酸奧布卡因與氧氟沙星對(duì)人角膜上皮細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用研究.pdf

1、隨著醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展,目前臨床上可供選擇的眼科用藥越來越多,隨著角膜感染的抗菌藥物、抗病毒藥物以及用于手術(shù)中的麻醉劑藥物等的廣泛應(yīng)用,為臨床治療提供了多種選擇機(jī)會(huì),而眼科藥物的毒性作用已引起臨床用藥者的高度重視并成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究課題。大部分的眼科藥物是通過眼表給藥的,極有可能首先會(huì)對(duì)角膜產(chǎn)生毒副作用,更甚者,可能會(huì)致盲。而角膜上皮作為角膜最外層,是防御外界致病因子侵犯的物理屏障,其結(jié)構(gòu)的完整性決定了角膜執(zhí)行正常的生理功能。因此,研究

2、藥物對(duì)于人角膜上皮細(xì)胞(HCEP)的影響對(duì)于制定安全的臨床給藥方案,建立科學(xué)的新藥研究模式以及篩選高效、低毒的眼科藥物具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。到目前為止,尚未見常用表面麻醉劑鹽酸奧布卡因與喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對(duì)人角膜上皮細(xì)胞的毒副作用報(bào)道,本文以實(shí)驗(yàn)室自建的非轉(zhuǎn)染、無致瘤性的HCEP細(xì)胞系為研究體系,研究了鹽酸奧布卡因與氧氟沙星對(duì)HCEP細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。
　　本文分別將臨床濃度為4 g/L的鹽酸奧布卡因倍比稀釋至0.1

3、25 g/L,臨床濃度為3 g/L的氧氟沙星倍比稀釋至0.1875 g/L,對(duì)體外培養(yǎng)的HCEP細(xì)胞加藥處理,通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的狀態(tài)、MTT檢測(cè)細(xì)胞的活性,結(jié)果表明,鹽酸奧布卡因和氧氟沙星分別在0.5~4 g/L和1.5~3 g/L的濃度范圍內(nèi)能夠引起HCEP細(xì)胞的毒副作用,通過流式細(xì)胞儀研究其細(xì)胞周期變化,結(jié)果顯示1 g/L鹽酸奧布卡因與3 g/L氧氟沙星均使HCEP細(xì)胞周期發(fā)生了S期阻滯,為進(jìn)一步研究這兩種藥物的毒副作用機(jī)理,

4、通過AO/EB熒光雙染色法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率、Annexin V/PI觀察細(xì)胞凋亡情況、凝膠電泳檢測(cè) DNA斷片化、以及透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),結(jié)果表明,這兩種藥物在上述濃度下均確能引起細(xì)胞凋亡,電泳結(jié)果中呈現(xiàn)出典型的梯狀條帶,在電鏡中能清楚地觀察到細(xì)胞空泡化、染色質(zhì)固縮和凋亡小體等凋亡細(xì)胞的理化特征。本文還進(jìn)一步探討了這兩種藥物凋亡誘導(dǎo)途徑,通過觀察加藥后HCEP細(xì)胞線粒體膜電位變化,以及半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶caspase-

5、2,-3,-9的變化情況,結(jié)果顯示,此兩種藥物處理后的HCEP細(xì)胞線粒體膜電位均發(fā)生了下降,線粒體均產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng),而起始者caspase-2,-9在一定時(shí)間內(nèi)濃度增加到最大值并最終激活了執(zhí)行者caspase-3,進(jìn)一步引起了細(xì)胞凋亡。從而,推測(cè)出這兩種藥物極有可能通過線粒體途徑誘發(fā)了凋亡作用。
　　本文以自主建立的非轉(zhuǎn)染、無致瘤性的 HCEP細(xì)胞系為研究體系,進(jìn)行了眼表麻醉劑鹽酸奧布卡因和喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對(duì)HCEP細(xì)胞凋亡