2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、第一部分HSV-1感染對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 目的:建立單純皰疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1,HSV-1)感染人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(Retinalpigmentepithelialcell,RPE)的體外模型,觀察HSV-1感染對(duì)體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 方法:以感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)為5的HSV-1(F株)感染體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞。

2、用相差顯微鏡觀察RPE細(xì)胞的形態(tài)變化;用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)觀察HSV-1感染對(duì)RPE細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響;用PCR和免疫熒光法驗(yàn)證HSV-1感染RPE細(xì)胞是否成功。 結(jié)果:成功在體外建立了HSV-1感染RPE的細(xì)胞模型。HSV-1感染RPE細(xì)胞8h后出現(xiàn)病變,細(xì)胞形態(tài)開始變得細(xì)長(zhǎng)和皺縮;感染24h后細(xì)胞病變更加明顯,細(xì)胞間間隙增加,甚至可見多核巨細(xì)胞;感染48h后所有細(xì)胞均變圓,細(xì)胞開始出現(xiàn)脫落甚至死亡。MTT結(jié)果顯

3、示HSV-1感染RPE24h和48h后能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)(P<0.01),細(xì)胞的抑制率分別為(16.37±3.28)%和(47.91±6.39)%;流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HSV-1感染可影響RPE細(xì)胞的細(xì)胞周期,但對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。 結(jié)論:HSV-1能感染體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞,抑制RPE細(xì)胞的增殖,并影響RPE細(xì)胞的細(xì)胞周期。 第二部分HSV-1感染對(duì)人角膜上皮細(xì)胞及其TGF—βs和SMADs表達(dá)的影響 目的:建立單

4、純皰疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1,HSV-1)感染人角膜上皮細(xì)胞(humancornealepithelialcell,HCE)的體外模型,觀察HSV-1感染對(duì)HCE細(xì)胞中TGF—βs(TGF—β1、TGF—β2和TGF—β3)和SMADs(SMAD2和SMAD3)表達(dá)的影響。 方法:以感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)為5的HSV-1(F株)感染體外培養(yǎng)的HCE細(xì)胞

5、。在HSV-1感染HCE細(xì)胞0、4、8、12和24小時(shí)后,用相差顯微鏡觀察HCE細(xì)胞的形態(tài)變化;用RT—PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)檢測(cè)HCE細(xì)胞中TGF—βs(TGF—β1、TGF—β2和TGF—β3)和SMADs(SMAD2和SMAD3)基因的表達(dá);用間接免疫熒光法觀察HCE細(xì)胞中TGF—β1、TGF—β2,SMAD3和磷酸化SMAD3蛋白的表達(dá);同時(shí)還用ELISA

6、的方法檢測(cè)了HSV-1感染HCE細(xì)胞后TGF—β1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:HSV-1感染HCE細(xì)胞后,同正常HCE細(xì)胞形態(tài)相比較,感染后8hHCE細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)改變,細(xì)胞間間隙增加,可見較多多核巨細(xì)胞,感染24h后細(xì)胞病變更加明顯,細(xì)胞開始出現(xiàn)脫落甚至死亡;RT—PCR結(jié)果顯示TGF—β1在HSV-1感染HCE8h后表達(dá)開始降低,12h和24h降低更為明顯(p<0.01),SMAD3在HSV-1感染HCE12h和24h后表達(dá)顯著降低,

7、而TGF—β2、TGF—β3和SMAD2基因表達(dá)無(wú)明顯變化;間接免疫熒光結(jié)果顯示TGF—β1、SMAD3和磷酸化SMAD3蛋白在HSV-1感染HCE12h和24h后表達(dá)較正常HCE細(xì)胞降低,而TGF—β2蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化;同時(shí)ELISA結(jié)果亦顯示HSV-1感染HCE12h和24h后TGF—β1蛋白表達(dá)降低。 結(jié)論:HSV-1能感染體外培養(yǎng)的HCE細(xì)胞,TGF—β1和SMAD3可能參與了HSV-1感染角膜上皮細(xì)胞的病理過(guò)程。

8、 第三部分HSV-1感染人角膜上皮細(xì)胞后病毒miRNA的表達(dá)變化 目的:建立單純皰疹病毒1型(Herpessimplexvirustype1,HSV-1)感染人角膜上皮細(xì)胞(humancornealepithelialcell,HCE)的體外模型,觀察不同濃度的HSV-1感染HCE細(xì)胞后病毒miRNA的表達(dá)變化。 方法:以感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)分別為5,1和0.1的HSV-

9、1(F株)感染體外培養(yǎng)的HCE細(xì)胞,在HSV-1感染HCE細(xì)胞24小時(shí)后,用RealtimePCR方法檢測(cè)HCE細(xì)胞中病毒miRNA(hsv—miR—H1~hsv—miR—H6)的相對(duì)量。 結(jié)果:在正常細(xì)胞中病毒miRNA均無(wú)表達(dá);在HSV-1感染HCE細(xì)胞中僅hsv1-miR—H6有表達(dá),其它miRNA無(wú)表達(dá)或表達(dá)非常低,且以MOI=0.1組作為對(duì)照時(shí),MOI為5時(shí)hsv1-miR—H6的相對(duì)量為其的4.86倍,MOI為1時(shí)h

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