原型泡沫病毒的Bet蛋白與SUMO1蛋白相互作用的確定及功能初探.pdf

1、原型泡沫病毒（prototype foamy virus，PFV）是反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科的一員，能夠在人體內(nèi)產(chǎn)生持續(xù)性感染，但至今并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)會(huì)引發(fā)任何癥狀。Bet是PFV編碼的一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞核中也有少量分布。無(wú)論是在體內(nèi)還是體外，Bet都是PFV感染的細(xì)胞中，表達(dá)量最高的非結(jié)構(gòu)蛋白，其豐度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)病毒的其它蛋白，但在PFV病毒顆粒中檢測(cè)不到Bet蛋白。Bet的高表達(dá)可能與其對(duì)抗宿主的限制性因子APOBEC

2、3有關(guān)，除此之外，Bet可能在調(diào)控病毒結(jié)構(gòu)基因表達(dá)、成熟顆粒釋放和抑制病毒建立超感染方面起著重要的作用。研究表明Bet能夠被磷酸化修飾，而對(duì)Bet的其它修飾作用目前研究的很少。
　　SUMO(small ubiquitin-related modifier)是一種分子大小約為12 KD的小類(lèi)泛素修飾物，此家族包含四個(gè)成員，分別為SUMO1、SUMO2/3和SUMO4。SUMO化修飾是一種級(jí)聯(lián)酶反應(yīng)過(guò)程，需要在活化酶E1、結(jié)合酶E2

3、（又稱(chēng)UBC9）和連接酶E3的作用下完成。SUMO化是高度可逆的修飾，被SUMO化修飾的蛋白在去SUMO化酶，主要是SENP1作用下，會(huì)發(fā)生去SUMO化。SUMO化具有多種效應(yīng)，主要是改變靶蛋白與其它蛋白的相互作用，進(jìn)而影響靶蛋白的定位、穩(wěn)定性及生物學(xué)活性。關(guān)于病毒蛋白被SUMO化修飾的相關(guān)研究很多，但是，到目前為止尚未報(bào)道過(guò)泡沫病毒屬的蛋白能夠被SUMO化修飾。
　　本文通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)PFV的Bet蛋白能夠與SUMO1

4、相互作用，并由此展開(kāi)了相關(guān)研究，具體獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，我們獲得了41種與PFV Bet相互作用的蛋白，其中包括SUMO化信號(hào)通路中的修飾物SUMO1及結(jié)合酶UBC9;
　　2.在HEK293T細(xì)胞中證明了Bet蛋白與SUMO1存在相互作用，但未檢出其與UBC9存在相互作用;
　　3.Bet蛋白與SUMO1的相互作用主要發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)，且Bet蛋白影響了SUMO1的細(xì)胞核定位，這種定位的改變

5、可能會(huì)影響其它細(xì)胞核蛋白的SUMO1修飾;
　　4.得到了穩(wěn)定下調(diào)SENP1表達(dá)的HEK293T細(xì)胞系，并在此細(xì)胞系中證明了 Bet能夠被SUMO1修飾;
　　5.Bet蛋白的SUMO1修飾，并沒(méi)有影響B(tài)et蛋白的二聚化及多聚化形式。
　　綜上所述，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，泡沫病毒屬的重要成員PFV的非結(jié)構(gòu)蛋白Bet能夠與SUMO1相互作用，并且能夠被SUMO1所修飾，這種修飾作用并不影響B(tài)et的二聚化及多聚化，但Bet影