基于周仲瑛教授“瘀熱論”的犀角地黃湯防治腦梗死的機(jī)制研究.pdf

1、目的:在周仲瑛教授提出的中風(fēng)病“瘀熱相搏”的病機(jī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)，探討犀角地黃湯對“瘀熱”證H型高血壓（血同型半胱氨酸水平-Hcy升高同時(shí)伴有高血壓）、大鼠腫瘤壞死因子-(a)(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、血漿溶血磷脂酸(LPA)、磷脂酸(PA)、凝血功能、血液流變學(xué)的影響;并且探討犀角地黃湯對內(nèi)毒素誘導(dǎo)下持續(xù)性大腦中動(dòng)脈栓塞模型(pMCAO)大鼠腦組織的自噬相關(guān)Atg-5、Beclin-1等蛋白的mRNA表

2、達(dá);以及新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá);透射電鏡下觀察自噬體及染色的LC-3抗體的表達(dá)。并在臨床運(yùn)用犀角地黃湯干預(yù)了瘀熱證型的急性腦梗死患者，并觀察相關(guān)的瘀和熱的指標(biāo)變化。
　　方法:造?！梆鰺帷弊CH型高血壓大鼠成功后采用低中高三種不同劑量犀角地黃湯（0.75g生藥/ml、1.5g生藥/ml、3.0g生藥/ml）水煎液灌服，并選擇空白對照，分別檢測各組血壓、血Hcy、TNF-α、 IL-6、 LPA、PA、及凝血功能、血

3、液流變學(xué)，并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。造模內(nèi)毒素誘導(dǎo)下持續(xù)性大腦中動(dòng)脈栓塞模型(pMCAO)大鼠，造模后進(jìn)行分組，并采用不同劑量犀角地黃湯進(jìn)行干預(yù)，分別提取RNA、PCR檢測Rat-atg-5、Beclin-1等基因的表達(dá);透射電鏡下觀察染色的LC-3抗體表達(dá)。進(jìn)行新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)，并以LPS誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激及凋亡，應(yīng)用LPS(10ug/ml)刺激誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷模型，觀察自噬體及相關(guān)蛋白的表達(dá)。臨床隨機(jī)篩選80例中醫(yī)

4、辨證為瘀熱證型的腦梗死患者，分為對照組和觀察組，使用犀角地黃湯進(jìn)行干預(yù)，觀察白細(xì)胞介素-6以及血漿纖維蛋白原的變化。
　　結(jié)果:治療前后比較，犀角地黃湯治療組對“瘀熱”證H型高血壓組大鼠的Hcy、TNF-α、IL-6、LPA、PA、及凝血功能、血液流變學(xué)的影響與對照組相比有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），尤其以中低劑量為佳?！梆鰺帷弊CpMCAO模型大鼠中Atg-5、Beclin-1mRNA的表達(dá)、模型組Atg-5和B

5、eclin-1 mRNA的表達(dá)明顯上升，犀角地黃湯中劑量治療組和陽性藥組與模型組比較均顯著降低其表達(dá)。（*p＜0.05，**p＜0.01）。LC-3抗體染色顆粒提示，空白組表達(dá)不明顯，模型組造模成功，尤其在第六天，模型組明顯增多;陽性藥組明顯抑制LC-3的表達(dá)，第三和第六天到達(dá)最佳;低劑量組抑制效果不明顯;中劑量組抑制效果好于高劑量組，第六天抑制效果最佳。對于LPS誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷模型，高中低劑量(40mg/ml，20mg/ml，10mg

6、/ml)的犀角地黃湯處理誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞12小時(shí)，中劑量組(20mg/ml)和陽性藥阿司匹林均顯著降低了atg-5和beclin-1 mRNA的表達(dá)，和模型組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。自噬誘導(dǎo)劑(rapamycin，100μmol/L)明顯逆轉(zhuǎn)了犀角地黃湯的作用，自噬抑制劑(3-MA，2mmol/L)加強(qiáng)了犀角地黃湯對atg-5和beclin-1 mRNA表達(dá)的抑制作用。臨床病例觀察發(fā)現(xiàn):犀角地黃湯治療組在纖維蛋白原、白介素-6等方