嵌合1a與1b亞型包膜蛋白基因HCV細(xì)胞培養(yǎng)模型的初步研究.pdf_第1頁
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1、目的：通過構(gòu)建嵌合丙型肝炎病毒(HCV)1a與1b亞型包膜蛋白基因的質(zhì)粒，建立嵌合型HCV的體外細(xì)胞培養(yǎng)模型，為針對(duì)中國(guó)HCV主要基因型的抗病毒藥物篩選和HCV抗原免疫效果評(píng)價(jià)提供有效模型。 方法：1．運(yùn)用融合PCR技術(shù)，通過酶切、重組等手段將中國(guó)HCV HeBei分離株(1b)和H77株(1a)的全長(zhǎng)包膜蛋白基因(E1/E2)引入JFH1株(2a)基因骨架，構(gòu)建包膜蛋白基因區(qū)相互置換的嵌合病毒(1b/2a和1a/2a)全長(zhǎng)基因

2、組質(zhì)粒；2．HCV(1b/2a)和HCV(1a/2a)全長(zhǎng)基因組質(zhì)粒經(jīng)Xbal單酶切線性化后體外轉(zhuǎn)錄獲得全長(zhǎng)病毒RNA，將RNA轉(zhuǎn)染Huh7.5.1細(xì)胞，進(jìn)行間接免疫熒光、蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。 結(jié)果：1．成功構(gòu)建了含嵌合病毒1b/2a、1a/2a全長(zhǎng)基因組的重組質(zhì)粒pHe-Bei(E1E2)/JFH1和pH77(E1E2)/JFH1；2．分別以pHeBei(E1E2)/JFH1和pH77(E1E2)/JFH1為模板，體外轉(zhuǎn)錄獲得病

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