HIV包膜蛋白在酵母系統(tǒng)中的表達(dá)、純化及其應(yīng)用研究.pdf

1、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所引起的一種嚴(yán)重的傳染性疾病。由于HIV的高度變異，尚缺乏有效的預(yù)防性疫苗，目前血清學(xué)診斷和社會(huì)防控是控制HIV傳播的主手段。研究表明，HIV的中和抗體和特異血清標(biāo)志主要位于包膜蛋白Env上，對于HIV包膜蛋白的研究主要是通過多種表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行的。本研究利用釀酒酵母和畢赤酵母兩種表達(dá)系統(tǒng)對HIV膜蛋白進(jìn)行表達(dá)、純化

2、和性質(zhì)研究。 利用生物信息學(xué)軟件GCG對HIV gp160蛋白進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)預(yù)測和疏水性及潛在糖基化位點(diǎn)分析，結(jié)果表明aa511-aa537，aa679-aa703肽段是gp160中最強(qiáng)的疏水區(qū)域，可能影響蛋白的可溶性；構(gòu)建了強(qiáng)疏水區(qū)段缺失的gp160突變體，在釀酒酵母中表達(dá)，獲得可溶性較好的rgp160△12蛋白，且呈現(xiàn)為糖基化的三聚體形式，對于HIV陽性血清尤其是早期感染的血清具有良好的反應(yīng)性，提示其可能應(yīng)用于HIV各類診斷試

3、劑的價(jià)值。 利用畢赤酵母分泌表達(dá)gp120及其N端缺失突變體，結(jié)果表明，N端缺失60aa的表達(dá)量最高，而N端缺失90aa則不能表達(dá)，提示N端氨基酸的分布情況對于gp120的表達(dá)和/或分泌途徑有顯著的影響；分泌表達(dá)的rgp120較大腸桿菌來源的gp120，對HIV陽性血清有較高的檢出率，提示其可能較好地模擬了gp120的天然表位構(gòu)象。 利用多尺度的發(fā)酵條件摸索，獲得了釀酒酵母胞內(nèi)表達(dá)和畢赤酵母分泌表達(dá)的高密度發(fā)酵工藝，經(jīng)過