羥苯磺酸鈣對大鼠2型糖尿病腎病作用機(jī)制的研究.pdf

1、羥苯磺酸鈣(Calciumdobesilate)是一種微血管保保護(hù)劑，具有降低血小板粘附和血粘度，改善微循環(huán)障礙等作用，現(xiàn)主要應(yīng)用于糖尿病微血管病變，，但是在治療2型糖尿病腎病方面報(bào)道甚少。為此，本課題一方面觀察羥苯磺酸鈣對高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖及蛋白激酶C(PKC)表達(dá)的影響；另一方面觀察羥苯磺酸鈣對大鼠糖尿病腎病的作用，初步探討羥苯磺酸鈣防治DN的作用機(jī)制，為將其開發(fā)應(yīng)用于臨床防治糖尿病腎病提供理論依據(jù)。 第一部分羥苯磺酸鈣

2、對高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞增殖的影響 目的:觀察羥苯磺酸鈣對體外培養(yǎng)的高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響。 方法:高糖濃度采用30mmol·L-1。用不同劑量的羥苯磺酸鈣(5μmol·L-1，10μmol·L-1，20μmol·L-1，50μmol·L-1，100μmol·L-1)處理體外培養(yǎng)的高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞，與未用羥苯磺酸鈣處理的體外培養(yǎng)的高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞同步培養(yǎng)。24h后用MTT法測定并比

3、較系膜細(xì)胞增殖水平。 結(jié)果:與未用羥苯磺酸鈣處理的高糖對照組比較，當(dāng)羥苯磺酸鈣濃度為5μmol·L-1時(shí)，膜細(xì)胞的增殖未受到抑制(P＞0.05)：當(dāng)羥苯磺酸鈣濃度等于或大于10μmol·L-1時(shí)，系膜細(xì)胞的增殖明顯受到抑制，且其抑制作用呈劑量依賴性增強(qiáng)(P＜0.05)。 結(jié)論:羥苯磺酸鈣能抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞的增殖。 第二部分羥苯磺酸鈣對高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞PKC表達(dá)的影響 目的:探討對羥

4、苯磺酸鈣高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞PKC表達(dá)的影響。 方法:在大鼠腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)基中加入低糖(5.6mmol·L-1)和高糖(30mmol·L-1)分別作為正常對照組和高糖對照組，同時(shí)采用不同劑量的羥苯磺酸鈣(10μmol·L-1，20μmol·L-1，100μmol·L-1)處理高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞。同步培養(yǎng)72h后收集細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR和Western的方法測定PKC的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。 結(jié)果:與正常對

5、照組比較，其它實(shí)驗(yàn)組PKC的表達(dá)顯著增高(P＜0.05)；與高糖對照組比較，羥苯磺酸鈣可呈劑量依賴性的抑制PKC的表達(dá)(P＜0.05)。 結(jié)論:高糖能顯著上調(diào)系膜細(xì)胞PKC的表達(dá)，羥苯磺酸鈣能明顯抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞PKC的表達(dá)，提示羥苯磺酸鈣具有抗腎纖維化的作用，因此可能對DN具有防治作用。 第三部分羥苯磺酸鈣對2型糖尿病大鼠腎臟病變的作用 目的:研究羥苯磺酸鈣對2型糖尿病大鼠腎臟病變的作用。 方法

6、:復(fù)制2型糖尿病大鼠模型。30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對照組、糖尿病大鼠對照組和羥苯磺酸鈣治療組。觀察第24周末各實(shí)驗(yàn)組的血糖、尿白蛋白排泄率、血脂、尿素氮、腎重/體重比值及病理變化，用免疫組化、Westernblot的方法分別檢測各組腎組織中PKC蛋白表達(dá)的水平。用質(zhì)譜分析儀分析羥苯磺酸鈣和肌酐結(jié)合情況。 結(jié)果:羥苯磺酸鈣對血糖無影響。糖尿病大鼠組較正常對照組尿白蛋白排泄率、膽固醇明顯增高(P＜0.05)，腎重/體重比值明顯

7、上升(P＜0.05)，系膜增生和基底膜增厚明顯(P＜0.05)，PKC在組織中的蛋白表達(dá)顯著增加(P＜0.05)；而羥苯磺酸鈣治療組較糖尿病大鼠對照組尿白蛋白排泄率減少，血肌酐、尿素氮水平明顯降低(P＜0.05)，腎重/體重比值明顯下降(P＜0.05)，系膜增生和基底膜增厚有所減輕(P＜0.05)，PKC在腎組織中的蛋白表達(dá)明顯受到抑制(P＜0.05)。 結(jié)論:早期應(yīng)用羥苯磺酸鈣可減少糖尿病大鼠的尿蛋白排泄、降低血肌酐和尿素氮，